TIPE1在肝细胞肝癌中的作用和机制研究.docVIP

TIPE1在肝细胞肝癌中的作用及机制研究--《山东大学》2013年博士论文 肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和致死率在世界范围内分别位于第六位和第三位,且近年来其发病率有逐渐上升的趋势。HCC的发病机制复杂,肿瘤相关基因异常,如抑癌基因的甲基化、癌基因的过度激活,是HCC发生的重要因素。HCC进展迅速,对常规的化疗和放疗均不敏感,手术切除和局部消融治疗仅对早期肿瘤有效,因此,寻找新的治疗HCC的有效策略迫在眉睫。近年来,分子靶向治疗逐渐成为HCC治疗的研究热点。多激酶抑制剂索拉非尼是第一个用来治疗HCC的分子靶向药物,它能够有效改善晚期HCC患者的预后,证明了分子治疗在HCC中的重要性。建立有效的分子治疗方案关键在于阐明肝癌的发生机制,鉴定肿瘤发生的关键靶点。因此,深入研究HCC发病的分子机制,寻找能有效阻断HCC发生发展的新靶点具有重要意义。 TIPE1(tumor necrosis factor alpha-induced protein8-like1,TNFAIP8L1)是在2008年被发现的一个新基因,属于TEPE (tumor necrosis factor alpha-induced protein8, TNFAIP8)家族。该家族共有4个成员,TIPE、TIPE1、TIPE2与TIPE3,各成员间具有较高的同源性。人TIPE1与TIPE、TIPE2和TIPE3之间的同源性分别为57%、57%和55%,而人TIPE1与鼠TIPE1之间的同源性为82%。除TIPE外,该家族的其他成员都发现较晚,但已有研究表明,TIPE和TIPE2在肿瘤发生和免疫调控中发挥非常重要的作用。因此,深入研究TIPE家族另外两个成员的功能及其与疾病之间的关系显得十分必要。 TIPE1是最晚被发现的TIPE家族成员,迄今为止只有三篇文献。2008年Cell首次报道了TIPE1与细胞死亡间的重要关系。作者利用全基因组siRNA筛选能够调控坏死性凋亡的基因时发现,干扰TIPE1的表达可分别抑制凋亡和坏死性凋亡,提示其可能同时参与这两种细胞死亡的调控,是重要的细胞死亡调控蛋白。Cui等报道了TIPE1在小鼠组织中的表达谱,发现TIPE1在小鼠体内分布广泛,除成熟的T、B淋巴细胞外各组织中均能检测到其表达。此外,Wilson等利用基因芯片分析发现TIPE1可能与糖尿病引发的心脏代偿失调有关。然而,TIPE1在人体不同组织中的表达特点、其与疾病发生之间的关系以及是否参与细胞死亡的调控,迄今尚未见报道。 本课题前期研究发现,TIPE1在人体组织中分布广泛,特别是在肝脏中表达较高,且与癌旁组织对比,肝细胞肝癌中的TIPE1表达显著下降,提示TIPE1可能与肝细胞肝癌的发生有关。 在此基础上,本课题拟进一步研究TIPE1在人体内的表达分布和生物学功能,并对其在肝细胞肝癌发生中的作用及机制进行初步探讨。 一、TIPE1在人体组织中的表达谱研究 TIPE1在人体组织中的分布迄今尚未明确,本研究利用实时荧光定量RT-PCR.免疫组化及免疫荧光技术检测了人胚胎组织及成体组织细胞中的表达。 1.TIPE1mRNA在人胚胎及正常成体组织中的分布:本研究首先利用实时荧光定量PCR技术检测正常人及胚胎不同组织cDNA中的TIPE1mRNA的表达。结果表明,TIPE1在正常人体组织中分布广泛,大部分组织器官均有表达,其中肝脏的表达较高；但TIPE1在胚胎中只有大脑高表达。 2.TIPE1蛋白在正常人成体组织器官中的表达：为进一步研究TIPE1在成体组织中的分布,本研究利用TIPE1抗体通过免疫组化技术检测正常人不同组织器官中TIPE1蛋白的表达。免疫组化结果显示,多种正常人组织器官中均能检测到TIPE1的蛋白表达,其中气管的软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、胃的主细胞和壁细胞、膀胱的移行上皮、骨骼肌细胞和动脉管壁中的平滑肌细胞中TIPE1的蛋白表达水平较高。 3.TIPE1在肝细胞中主要表达在细胞浆：根据上述TIPE1的表达谱,选择肝脏作为研究的靶器官。利用免疫荧光技术,用TIPE1抗体检测癌旁来源的肝细胞系QSG7701中的内源性TIPE1表达,结果显示,TIPE1在肝细胞中主要表达在细胞浆。 二、TIPE1在肝细胞肝癌中表达明显下调,其表达与肝癌脉管转移负相关,与病理分级和患者预后显著正相关 1.与癌旁组织相比,肝细胞肝癌中的TIPE1表达明显下调,且与病理分级显著正相关并和临床转移负相关：收集26例肝细胞肝癌及其对应的癌旁组织标本和6例肝海绵状血管瘤组织,免疫组化检测TIPE1的表达,根据染色强度及染色范围进行免疫组化评分,统计学分析TIPE1表达与临床指标间的相关性。结果表明,肝海