探讨乙型肝炎病毒基因型和亚型的临床意义.pdfVIP

全国免疵学与分子生物学技术新进展研讨会 会议交流 HBV B基因亚型PCR反应条件为半巢式方法：第1 次扩增反应；反应体积30一中模板5一。心叩s 200删L． U，94℃预 塑I结果显示B基因型中的Ba亚塑C基因型中的C2亚型 引物BJl8tPCR组各为o．1p珊WL，Taq酶1．5 变性180s，94℃408，55℃405，72℃458，扩增35个循环．是本地的优势基因亚型． 3．HBeAg阳性或HB“岖阴性与HB弋巾NA基因型， 第2轮扩增反应。取第一次PcR产物2正作模板，dMrPs 基因亚塑的关系t 200pmol／L。引物25tPCR组各为O．1pmoVL，循环条件为l HBeAg阳性和H地阴性的慢性乙型 94℃预变性1805。94℃40s。58℃405，72℃408，扩增35个循肝炎患者B、B／C、C基因型频率比较，差异有统计学意义． 环，Ba、Bj亚型条件相同．用609／L的聚丙烯酰胺凝胶电 泳EB染色后，紫外灯下观察结果，Ba、Bj亚型PCR产物均乙型肝炎患者基因型分布频率不同，两组比较差异有统计 为110bp产物． HBV C基因亚型PCR反应条件为多对引物P(、R法tHBeAg阴性慢性乙型肝炎患者与B／C基因型HB“岖阳 分别采用c1组和C2组引物，扩增反应。总体积30正其中性与HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者问比较差异有统计 模板DNA5一，dNTP5200妒∞l／L，引物C1组与C2组各 U。94℃预变性1805，94℃40s， 为0．1pmol／L，Taq酵1．5 较，慢性乙型肝炎患者中C基因型的HBeAg阳性率明显 55℃40s，72℃45a。扩增35个循环．用609／L的聚丙烯酰 胺凝胶电泳EB染色后，紫外灯下观察结果．c1亚型PCR 产物为340bp，c2亚型PCR产物为240bp． 由于Bj与C1亚型在观察组中仅有各3例均为HBeAg阳 5．荧光定量HB、，DNA检测方法参照说明书操作方性。数量过少可能不足以说明问题未进行统计学比较，因而 法进行． 也未进行不同亚型之间的比较． 融统计学分析：使用sPSsll．o软件，进行统计分析， 襄2慢性乙型肝炎患者HBvDNA基因型 组问比较用r检验． 与HBeAg／eAb携带状态(％) 二、结果 1．采用基因型特异性多对引物巢氏PCR方法检测 HBv基因型：结果表明试验结果与P(’R预期片段大小一 致，PCR产物为281bp是B基因型，122bp是C基因型，同 4．HBV 时有122bp与281bp条带是B／C混合型．未见其他基因 DNA定量PCR与基因亚型的关联性t454倒 慢性乙型肝炎患者同时进行了HBVDNA定量PCR检测 型．基因亚型分析C2基因亚型是240bp、C1基因亚型是 340bp、Ba与Bj基因亚型均为110bp产物． 结果见表3．HBVDNA含量与基因亚型的比较以HBv 2．HBV基因型与基因亚型的分布，在454例患者DNA≥10‘拷贝数／ml和10‘拷贝数／m1为分组标准，B HBV 基因型的HBV DNA阳性标本中，B基因型68例(14．98％)，C基因 DNA含量低于Ba、Ba／c2、C、C2基因型 型338例(74．45％)，B／C混合基因型48例(10．57％)．B 统计学比较有显著性差异(f一14．69，Po．001If= 基因型中单纯Ba亚型35例(51．47％)．Bj亚型3例 (4．41％)，未分型30例(44．12％)，C基因型中C1亚型30．001．)