抗辐射菌lexA基因对受γ射线照射与MMC作用的大肠杆菌敏感性的影响.pdfVIP

第21 卷 第4 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.21, No.4 2003 年11 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. November 2003 抗辐射菌 lexA 基因对受 γ 射线照射和 MMC 作用的 大肠杆菌敏感性的影响 孙翠凤 刘芬菊 陈 剑 孔向蓉 宁 萍 （苏州大学放射医学与公共卫生学院 苏州 215007 ） 摘要 研究抗辐射菌lexA 基因在大肠杆菌细胞中的表达对其γ射线辐射抗性和丝裂霉素（MMC ）敏感性的影 响。应用电穿孔技术将携带有抗辐射菌lexA 基因的重组质粒PZA172 转入大肠杆菌JM109 ，其启动子为lacZ ， 用异丙基−硫代−β−D 半乳糖苷（IPTG ）诱导，（十二烷基磺酸纳）聚炳烯酰胺凝胶电泳（SDS）凝胶 电泳检测LexA 蛋白的表达。经受不同剂量γ射线照射和不同浓度的MMC 作用，平板菌落计数，绘制存活曲 线。抗辐射菌lexA 基因在大肠杆菌细胞中，经IPTG 诱导能稳定地表达，lexA 基因的显著表达降低了大肠杆 菌经γ 射线照射和MMC 作用后的存活率。抗辐射菌lexA 基因在大肠杆菌中的显著表达降低了大肠杆菌对γ 射线和MMC 的抗性，其作用机理还有待于进一步的研究。 关键词 抗辐射菌，辐射抗性，lexA 基因，大肠杆菌，丝裂霉素 中图分类号 R811.5 抗辐射菌（Deinococcus radiodurans ）是迄今为 的JM109 均生长在LB （1%胰蛋白胨，0.5%酵母提 止发现的一种对电离辐射、紫外线及其他 DNA 损 取物，1%NaCl ）培养液或含1.5%琼脂的LB 固体 伤因子都具有极强抗性的微球菌，是Anderson 等从 培养基上，培养温度为37℃。 辐射灭菌后变质的肉类罐头中分离出来的[1] 。研究 表明，这种独特的抗性归因于其具有高效而准确的 1.2 抗辐射菌KD8301 的lexA 基因电穿孔法转入 [2] 大肠杆菌JM109 DNA 修复系统 。目前已确认该菌具有切除修复和 重组修复，并且已有3 种基因polA 、recA 、uvrA 基 在抗辐射菌KD8301 的基因文库中，用Hind Ⅱ [3−5] 因被克隆，其表达产物的活性和功能已被确定 。 和BssH Ⅰ酶切，得到0.8 kb 的DNA 片段，该片段 文献[6]发现，并克隆了抗辐射菌lexA 基因，其ORF 含有完整的抗辐射菌lexA 基因，将此片段连接到质 全长633bp，编码210 个氨基酸，分子量为25.4ku ， 粒PUC19 的Sma Ⅰ的酶切位点，启动子为LacZ ， 其氨基酸序列与大肠杆菌 LexA 蛋白的同源性为 将携带有抗辐射菌 KD8301 lexA 基因的质粒载体 30.2%，该基因缺陷型菌株并没有改变其辐射抗性。 PUC19 ，命名为 PZA172 ，用电穿孔法转入大肠杆 在大肠杆菌细胞中，其自身的 LexA 蛋白是一种阻 8 菌JM109 ，转入基因的效率是10 个转化子/µgDNA 。 遏蛋白，正常条件下，阻遏lexA 基因、recA 基因和 通过氨苄青霉素抗性和蓝白斑筛选出转入重组质粒 其他可诱导基