粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子白细胞介素-3融合蛋白表达研究.pdfVIP

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子白细胞介素-3融合蛋白表达研究.pdf

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卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’()*!+(*# 年 月 $%%% !#$%%’()*$+,( .#(/%0$(,( ,- $%%% - 12 . !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素 ! !# 融合蛋白的表达研究 张 毅 屈贤铭 杨胜利 (中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心 上海 ) $%%$## 摘 要 利用 扩增得到粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子( )、白细胞介素 ( )完整基因片段,将其 234 0 5,0367 0# 890# 分别克隆至 ,构建成 / 融合蛋白基因, 序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克 5;,0 5,0367 890# =+ : 隆至 聚合酶表达载体 ,得到表达质粒 ,经转化至表达宿主 ( ),在 诱导下获 ?4+ ?@@ 7A 340(,#B9$!=;# 825 : : 得融合蛋白目的产物的直接表达。经6=6025;电泳鉴定扫描分析,目的基因产物表达量占菌体总蛋白量的#%C 以上,目的基因表达产物以包涵体的形式表达。 鉴定表明,该表达产物可以与 抗体及 抗 DEFGEHI0J)(G 5,0367 890# 体特异性结合。目的基因表达产物经过包涵体变性、透析复性及柱层析纯化,用 、 依赖细胞株 5,0367 890# 70! 检测,具有明显的生物学活性。 关键词 融合蛋白,基因表达,细胞因子 中图分类号 文献标识码 文章编号 ( ) K?L/ !%%%0#%!$%%%%#0%#!0%1 迄今为止,许多重组蛋白质已作为药物用于多 工程产品,具有较高的应用价值与潜在的发展前景。 种疾病的治疗中。为了寻求更为有效和具有更高生 材料与方法 物活性的重组药物,人们尝试对于天然蛋白质药物 进行突变研究,这些研究取得了很多进展,一些突变 # 材料 体已投入应用或进入临床试验。构建融合蛋白是寻 限制酶、高温 聚合酶( 酶)等均购 ## =+ - P 求高效、新型

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