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浅谈胆碱酯酶对分析有机磷农药残留的影响 崔凯 张磊 杨心宇 北京一轻高级j支术学校 摘要：本文阐述了目前我国农药残留快速检测技术酶抑制法在 结果判定 ： 使用 中存在 的问题和解决途径。并采用茭 白作为样 品对酶抑制法 中 结果以酶被抑制的程度 抑制值 表示。 产生假阳性的因素进行了分析与解决。讨论了对胆碱酯酶活性产生 当蔬菜样品提取液对酶的抑制值 ≥50％时，表示蔬菜 影响并提出了胆碱酯酶的优化反应条件。酶抑制法具有快速、简便、 中有高剂量有机磷或氨基 甲酸酯类农药存在 ，药品为阳性 灵敏及低成本等优点，并 已成为我国农药残留快速检测的主流技术。 结果。阳性结果的样品需要重复检验两次以上。 关键词 ：农药残 留 酶抑制法 胆碱酯酶 假阳性 对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农 农药残 留快速检测技术在我 国应用最多的是酶抑制 药品种和含量。 法，利用这一原理生产的各种速测卡、速测仪具有高 的专 一 2实验结果 性、灵敏性和准确性及低成本等优点，正越来越多地进 2．1样品处理方法对抑制值的影响 入蔬菜、果品、茶叶等生产基地、农贸市场、超市及监督部 将样品茭 白采用两种不 同的方法进行处理。第一组样 门，已成为我国农药残 留快速检测 的主流技术，是当前和 今后一段时期 内农产品农药残 留快速检测 的首选方法之 品剪切浸泡处理后进行检测 ，第二组则整株浸泡后检测。 ’ 一 实验数据结果显示剪切浸泡的样 品提取液对酶 的抑 O 制值大于 50％，呈 阳性，而整株浸泡的样品提取液对酶的 1材料与方法 1．1酶抑制法实验原理 抑制值则小于 50％，将数据结果进行方差分析得到 F I9． 30169 F 0．05 7．70865有显著性差异 ，说 明处理方法 在一定条件下，有机磷和氨基 甲酸酯类农药对胆碱酯 的不同对样品的抑制值是有影响的。见表 1。由于样品剪 酶正常功 能有抑制作用，其抑制值与农药 的浓度呈正相 关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 乙酰胆碱 水 切浸泡后使样品组织内部 的植物 次生物质渗透 出来抑制 了酶的活性 ，使样品提取液对酶 的抑制值增大 ，造成假阳 解 ，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质 ，用分光光度 性结果，因此在进行农药残留检测的操作上应采取不剪切 计在 412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制 的方法，谨防假阳性结果的产生。 值，通过抑制值可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或 表 1 样品处理方法对抑制值的影响 方差分析 氨基 甲酸酯类农药的存在。 1．2原料 试剂 仪器 原料 ：茭 白冲洗掉表面泥土，剪成 1cm 见方碎片，取 样 品 1g放入烧杯或提取瓶 中，加入 5mL缓冲溶液 ，震荡 1min～2min，到出提取液 ，静置3min～5min，待用。 试剂：①pH8．0缓冲溶液；②显色剂：分别取 160mg 二硫代二硝基苯 甲酸 DTNB 和 15．6mg碳酸氢钠 ，用 20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存；③底物：取 25．0mg 2．2浸泡时间对抑制值的影响 硫代 乙酰胆碱 ，加 3．0mL蒸馏水溶解 ，摇匀后置 4。C冰箱 将样 品茭 白整株浸泡在缓冲液中，分别浸泡0h、2h、 中保存备用。保存期不超过两周；④乙酰胆碱酯酶：用缓冲 4h、6h、8h后进行检测。 溶液溶解 ，3min的吸光度变化 AA0值应控制在 0．3以 数据结果显示随着浸泡时间的延长，样品茭白提取液 上。摇匀后 4℃冰箱中保存备用。保存期不超过 4天。 对酶的抑制值也随之增大 ，但在 4h的时候其抑制值达到 仪器 ：农药残留测定仪 博纳 CL—B… 。 顶峰值 ，随后抑制值则随时间的递增而减小。见图1。 1．3 实验方法 ①对照溶液测试：先于试管中加入 2．5mL缓冲溶液， 再加入 0．1mL酶液、0．1mL显色剂 ，摇 匀后于 37℃放置 15min以上 每批样品的控制时间应一致 。加入 0．1mL 底物摇匀，此时检液开始显色反应 ，应立即放入仪器 比色 池 中，记录反映3min的吸光度变化值 △A0。 ②样品溶液测试：先于试管中加入 2．5mL样品提取 液 ，其它操作与对照溶液测试相同，记录反映3min的吸光 度变化值 △AT。 抑制值 ％ 【 △A0一△A．r ／△A0】X100 图 1 浸泡时间对茭白抑制值的影响 式中：△A0一对照溶液反应 3min吸光度的变化值。 将数据结果进行方差分析得到 F 7．109094 F 0．05 △A_r一样 品溶液反应 3min吸光度 的变化 3．47805有显著有显著性差异，说明浸泡时间对茭 白的 值 。 抑制值有影响。见表 2。 294 电梯现场检验防范与措施 冯子源