实时荧光定量PCR技术在转基因检测中应用_敖金霞.pdfVIP

第40 卷第6 期 东 北 农 业 大 学 学 报 40(6): 141~144 2009 年6 月 Journal of Northeast Agricultural University June 2009 文章编号 1005－9369 （2009）06－0141－04 实时荧光定量PCR 技术在转基因检测中的应用 1 1* 1 2 敖金霞 ，高学军 ，仇有文，郭士成 （1． 东北农业大学生命科学与生物技术研究中心，农业部转基因生物产品成分监督检测测试中心，哈尔滨 150030； 2． 东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030） 摘 要：实时荧光定量PCR 技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。随着转基因产品大规模商 业化，转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。实时监测、定量准确、 灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR 反应后不需电泳检测等优点，使RQ-PCR 逐步成为转基因检测的重 要工具。 关键词：实时荧光定量PCR ；TaqMan 探针法；SYBR Green I 染料法；转基因检测 中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 随着有关转基因成分标签法的建立和对于转 TaqMan 探针法、分子信标法。另外还有MGB 探针 基因食品的重视程度及量化要求的提高，定性 法、荧光标记引物、杂交探针（Hybridization Probe） PCR 因其在转基因检测中的高敏感性差易造成假 法等。下面仅对几种常用的RQ-PCR 方法介绍如 阳性现象，以及操作误差和一些反应抑制因素带 下。 来的假阴性现象，使其已经不能再满足人们的需 1．1 TaqMan 探针法 要。在这种基础之上实时荧光定量PCR （Real-time TaqMan 探针是一段人工设计的可以和目标序 quantitative polymerase chain reaction ，RQ-PCR）发 列上、下游引物之间的序列配对的寡核苷酸，5 展起来，RQ-PCR 技术不仅实现了对DNA 模板的 标记一个报告荧光基团，3 标记一个淬灭荧光基 定量，而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、 团。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被 能实现多重反应、 自动化程度高、无污染性、具 淬灭基团吸收。但在进行延伸反应时，Taq 酶的 实时性和准确性等特点。 目前实时荧光定量PCR 5 →3 外切酶活性将探针酶切降解，失去荧光信 已广泛应用于分子生物学、农业、医学等学科的 号。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基 应用和基础研究领域，并已经在转基因检测中发 团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈 [1-2] 挥了不可替代的作用 。 正比。 1．2 SYBR Green I 染料法 1 RQ- PCR的基本原理 SYBR Green I 是一种结合于小沟中的双链DNA 实时荧光定量PCR 技术是指在PCR 反应体 结合染料。在PCR 反应体系中，加入SYBR 荧光染 系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时 料，SYBR Green I 荧光染料在延伸过程中特异性地 监测整个PCR 进程，最后通过标准曲线，对待 掺入DNA 双链后发射荧光信号，而没有掺入链中的 测样品中的未知模板进行定量分析的方