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逆相层析移动相吸旋光性背景值探讨 H2O 调和MeOH, AeCN 或THF…由于该等有机溶剂的化学结构式，对于紫外光 ( 190-380nm )范围波长的光束能量具有相当的吸收性，而有( Absorbance Unit ) 。 这些一定的光量吸收值吸旋光性的背景现象，确实存在于紫外光UV 检测器。该吸 旋光性的背景，经由电子回授设计的抑制，可以将之“归零”成为LC 系统的基线 ( Baseline ) 。 如下图所示，MeOH 于UV = 220nm 或更低波长，就显出相当明显的吸旋光性，使 得MeOH 不太适用于UV = 210nm 或更低波长的检测应用。AeCN 于UV = 200nm 或更低波长，才稍有吸旋光性。因此，经常得实行UV=210nm 或更低波长的检测， AeCN 比之MeOH 更适用于RPLC 移动相的调和。 ( 1 ) Linear Gradient 线型梯度增变-基线倾斜漂移 在220nm 较低波长，B 项移动相，AeCN 逐量增多，检测吸光背景逐增，因 而基线随之上漂。 A%/B%=65 / 35→50min→10/90 ( 2 ) Step Gradient 逐段梯度增变-基线逐段漂移 A% / B% = 80 / 20 →50min→ 50 / 50 →10min ( 3 ) Step Isocratic 逐段固定比例增变- 基线逐段随之变动 A% / B% = 50 / 50 → 20min → 20 / 80 Gradient Elution 基线逐渐上漂，这一现象，特别是在UV 较低220nm 波长， 或更低波长如210nm, 203nm 更会明显地出现基在线漂的状况。请参照下图所示: Gradient Elution 操作，改善或减缓基在线漂的建议作法? *改用较高UV 波长作检测 *改用纯度更高的光谱级有机溶剂 *改用更优质的HPLC 级H2O *改用较弱吸旋光性的有机溶剂，例如以AeCN 取代MeOH *降低感度设定 *延长梯度时间或减缓梯度增变量 请参照以下图示: