不同培养条件对黄牛卵母细胞第一极体排出影响.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 不同培养条件对黄牛卵母细胞第一极体排出的影响 李东伟 (阜阳师范学院生命科学院，安徽阜阳，236041) 引言 第一极体作为具有完整细胞功能的细胞，不仅常被作为判断卵母细胞核成熟的主要依 据，在人类辅助生殖技术中亦可作为选择移植胚胎的重要依据，其活检分析对提示卵母细胞 分裂异常具有重要价值。极体的生殖功能也已获证实，1998年Wakayama掣lJ报道利用小鼠 PBl重组卵母细胞获得了后代，．2003年He纠2j成功利用玻璃化冻存小鼠极体得到了具有正 常繁殖能力的后代。目前，国内外有关研究报道绝大多数限于小鼠【314J，很少有利用牛、羊等 大型家畜动物极体进行种质资源保存或核移植研究的报道。本研究旨在探究体外培养条件对 黄牛卵母细胞第一极体排出的影响，为利用动物极体作为一种新的基因来源，建立种质资源 库或进行核移植研究创造条件。 材料方法 卵巢收集自合肥市黄牛定点屠宰场，使用抽吸法获取卵丘卵母细胞复合体。培养液为 异。 结果 10rtg／mlFSH和LH、1．01ag／mlE2和0．3mM丙酮酸钠对黄牛卵母细胞PBI排出有显著促 PBl排出显著增高。卵巢储运温度和时间对黄牛卵母细胞PBl排出有显著影响，低于25℃时 于其它卵泡(53．12-1：2．50，45．004-14．72，P0．05)。 讨论 FSH和LH配合使用能显著促进卵丘扩散和极体排出，而高浓度FSH(2000ng／m1)会显 著增加卵母细胞第一次减数分裂错误，导致其非整倍性升高。将雌激素受体特异抗体注入小 鼠GV期卵母细胞发现，多数PBl提前排出。而作为能量底物，极体排出时丙酮酸盐摄入量 和乳酸盐生成量较GVBD阶段显著减少。卵母细胞在卵泡微环境内生长，随着卵泡直径的增 加，产生并分泌透明质酸，从而中断卵丘与卵母细胞间广泛存在的缝隙连接，使卵母细胞受 到的成熟抑制作用减弱或消失而逐渐恢复减数分裂能力。而体外培养环境下，过多的卵母细 胞聚集则易造成营养物的匮乏和代谢废物的积累，可以推测卵母细胞生长有一定的密度限制。 卵巢离体时间过长，会因代谢障碍引起缺氧及有害物质积累等，导致卵泡内卵母细胞生物活 性降低或退化甚至死亡。温度过高也会使卵母细胞出现热应激，影响卵母细胞遗传物质的稳 定。 参考文献 Tand of fast canbeusedforthe normal 【l】WakayamaYanagimachi＆Thebody polar production in offspringmice．BiologyofReproduction，1998，59：100,--104． Z LiuHCandZev materialasa ofnuclear 【2】HeY Rosenwaks．Cryopreservationpotential of and method fertilitypreservation．FertilitySterility,2003，2(79)：347-354． 【3】范必勤．哺乳动物第一和第二极体的研究．农业生物技术学报，2000，8(2)：103—105． 1～12． 【4】张德福．哺乳动物极体功能的重新认识．生物学通报，2002，37(4)：1 16