牛奶中黄曲霉毒素M1检测方法.docVIP

牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法 食品质量与安全 王婉婷 摘要：采用免疫亲和柱—荧光光度法快速测定和微细柱快速检测方法测定牛乳中黄曲霉毒素 M1，方法具有准确、简单、快速、安全等优点，可以满足少量和批量样品的检测需要。 关键词：牛奶；黄曲霉毒素M1；快速检测 Rapid detecting aflatoxin m1 in milk Student majoring in Food Quality and Safety WangWanting Abstract:Aflatoxin M1 in milk are extracted and separated by immunoaffinity column and Micro column for rapid detection method Key words: milk ;rapid detecting aflatoxin M1 ;aflatioxin M1 immunoaffinity column 一．前言 近代研究表明当奶牛食用饲料中含有黄曲霉素Bl时,牛奶和其他乳制品会含有黄曲霉素Ml［1］。黄曲霉毒素Ml的毒性和致癌性与黄曲霉毒素Bl的基本相似。由于牛乳及其制品是人类特别是婴儿的主要食品，因此各国对其限量的要求十分严格。我国及许多国家规定牛奶及奶制品中黄曲霉毒素Ml的含量不得超过0.5ug\kg；所以，快速、方便、准确的检测方法在牛奶的检测中十分重要， 二．主要检测方法 2.1免疫亲和柱—荧光光度法快速测定 2.1.1测定原理：试样经过离心、脱脂、过滤后，滤液经过键合有黄曲霉毒素Ml特殊抗体的免疫亲和柱净化，此抗体对黄曲霉毒素Ml具有专一的识别能力，黄曲霉毒素Ml键合在分离柱中的抗体上。用甲醇与水之比为10：90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去；以甲醇与水之比为80：20 的混合液通过分离柱洗脱，加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度。衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素Ml。 2.1.2仪器设备与试剂 系列真菌毒素专用荧光光度计（进口）；离心机（相对加速离心力大于2000g ）；空气压力泵；玻璃试管（12mm*75mm ，无荧光特性）玻璃纤维滤纸（直径11m ，孔径0.5um ）黄曲霉毒Ml免疫亲和柱进口）甲醇为液相色谱级纯；氯化钠为分析纯；溴储备液（0.01﹪ ）：称取适量溴溶于水，配成质量分数为0.01﹪ 的储备液，避光保存溴水使用液（0.002﹪ ）：取10ml质量分数为0.01﹪ 的溴溶液加入40ml水混匀，于棕色瓶中保存备用（需现用现配）。荧光光度计标定溶液（进口）：红色标定管（内含0.00680g二水硫酸奎宁，20ml浓度为0.05mol\ml 硫酸溶液，此溶液相当于2ng\g 黄曲霉毒素Ml标准溶液；黄色标定管内含0.00340g 二水硫酸奎宁，2ml浓度为0.05mol\ml硫酸溶液，此溶液相当于1ng\g 黄曲霉毒Ml标准溶液）；绿色标定管（内含2ml浓度为硫0.05mol\ml酸溶液，此溶液不含黄曲霉毒素Ml）。 2.1.3分析步骤 (1)样品提取 液体牛乳及牛乳制品：量取50ml液体样品，加入1.0g 氯化钠，在离心机上以2000g离心10min，仔细地将用于牛奶分析的有效部分低层移取，不要扰动顶部脂肪层，将脱脂的牛奶以玻璃纤维滤纸过滤。 (2)净化 将免疫亲和柱连接于10ml玻璃针筒下。准确移取10.0ml上述澄清滤液注入玻璃针筒中，将空气压力泵与针筒连接，调节压力使溶液以约6ml\min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2-3空气通过柱体。以10ml甲醇与水之比为10:90的混合液清洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2-3空气通过柱体。准确加入1.0ml甲醇与水之比为80:20的混合液洗脱，流速为1-2ml\min，收集洗脱液于玻璃试管中，供检测用。 (3)测定 荧光光度计校准：在激发波长360nm ，发射波长50nm条件下，以绿色标定管调节荧光光度计的荧光强度值读数为0.0；以红色标定管调节荧光光度计的荧光强度值读数为2.0；以黄色标定管验证荧光光度计的荧光强度值读数应该为1.0±0.2 。 样液测定：取上述洗脱液加入1.0ml质量分数为0.002﹪溴溶液，于荧光光度计中测定黄曲霉毒素Ml含量。 (4)结果计算 荧光光度计测定结果按下式计算 X=cV/m (10） 式中：X为试样中黄曲霉毒素Ml含量，（ug\kg ）；c为荧光光度计中读取的样液中黄曲霉毒素Ml 的浓度（ng\ml）；V为样液最终定容体积（ml）；m为最终样液所代表的试样量（g）。 2.2微细柱快速检测方法 黄曲霉素的Ml微细柱快速检测方法,检测范围大约为0