实验二药物血浆蛋白结合率测定.docVIP

实验二 药物血浆蛋白结合率测定 药物血浆蛋白结合率是药物与血浆蛋白结合的量占药物总浓度的百分率，是药物代谢动力学的重要参数之一。它影响药物在体内的分布、代谢与排泄，从而影响其作用强度和时间，并往往与药物的相互作用及作用机制等密切相关。研究药物血浆蛋白结合率的方法包括常规的平衡透析法、超滤法、超速离心法、凝胶过滤法分配平衡法稳定同位素-GC-MS法光谱技术对于新药研究开发指导临床合理用药都具有重要意义。 血浆蛋白结合率 平衡透析法 【实验原理】平衡透析法基本原理将蛋白置于一个隔室内，用半透膜将此隔室与另一隔室隔开。蛋白等大分子不能通过此半透膜，但系统中游离配基可自由通过。当达到平衡时半透膜两侧自由配基的浓度相等。若系统中自由配基的总量已知，测定不含蛋白隔室中自由配基的浓度，即可推算与蛋白结合的配基量。游离磺胺药含量（mg%）= ×应用标准液浓度×样品稀释倍数 标准管光密度 fb：血浆蛋白结合率； Dt：血药总浓度（透析袋内血浆药物浓度）； Df：游离药物浓度（透析袋外缓冲液中药)； 【实验结果与分析】 由于实验过程中鸡和兔的采血量分别有限，所以每人只做了一种血样。本人开始做的是兔的血样，磺胺药物浓度为0.025M，但在透析平衡后，吸出袋外透析液少许，加等量磺基水杨酸试剂，检查有白色沉淀析出，则说明有血浆蛋白漏出，所以该样品作废。分析原因有以下几点： 1）装透析液的广口瓶不干净，造成污染。 2）用于给袋外透析液加入磺胺药溶液的注射器不干净，前面实验可能吸入过血样，造成后面的蛋白沉淀。 3）在打开半透膜的过程中，对膜内侧造成了污染。 2.由于第四组多了一个药物浓度为0.00625M的鸡的血样，所以透析平衡后的实验步骤就做的是这个样品的。实验结果如下： 1）经测定， a.标准管光密度为0.415； b.测定管光密度（半透膜内溶液）三次平行分别为0.008、0.005、0.008则,测定 管光密度（内）为0.008+0.005+0.008/3=0.007； c.测定管光密度（膜外溶液）三次平行分别为0.003、0.003、0.004，则测定管光密度（外）为0.003+0.003+0.004/3=0.0033； d.应用标准液浓度为3.75ug/ml，换算成0.375mg/100ml； e.样品稀释倍数为40倍。 2）则计算结果如下： 0.007 膜内磺胺药含量（mg%）= × 0.375mg/100ml×40= 0.253%; 0.415 0.0033 膜外游离磺胺药含量（mg%）= × 0.375mg/100ml×40= 0.119%； 0.415 0.253%—0.119% = × 100%=52.96%; 0.253% 【讨论】 该实验采用平衡透析法进行测定，平衡透析法基于药物结合的平衡原理，是测定药物游离浓度最常用的方法。该法具有简单、经济、受实验因素的干扰小等优点，是研究药物血浆蛋白结合率的经典方法，但该法也存在一定的缺点： 1) 透析平衡时间较长； 2 ) 血浆和缓冲液的PH值以及离子强度必须严格控制； 3）受稀释作用以及体积迁移效应的影响； 4）非特异性的透析设备表面的药物吸附效应。 同时，实验温度影响也很大，一般都在37度,空气浴中震荡加速平衡。如果药物不稳定可以采用低温或加入适量的稳定剂。透析时间的确定可以做对照实验用血浆代替同体积的缓冲液,测定袋内外达平衡时的时间。