脂质体复合庆大霉素治疗慢性骨髓炎的实验与研究.pdfVIP

脂质体复合庆大霉素治疗慢性骨髓炎的实验研究 唐辉 徐永清 马涛 周田华 李军 丁晶 成都军区昆明总医院全军骨科中心 摘要 目的：探讨不同脂质体庆大霉素对兔胫骨慢性金黄色葡萄球菌骨髓炎的治疗作用。方 法：制备阳离子、阴离子、中性脂质体，并分别包裹庆大霉素制成不同的庆大霉素脂质体。 常规构建兔胫骨骨髓炎模型，采用不同的庆大霉素脂质体以及单独使用庆大霉素进行静脉注 射治疗，治疗时间为 3 周，于治疗后行 X 线检查和细菌学检查。 结果：静脉注射阳离子 庆大霉素脂质体对慢性骨髓炎的治疗效果显著优于阴离子、中性脂质体和单独使用庆大霉 素，但仍不能达到 100％治愈。单独使用庆大霉素出现了较严重的并发症。结论：阳离子脂 质体改变了庆大霉素的药代动力学，可有效促进抗生素的骨髓内浓聚，是一种有效的非传统 抗生素释药载体，对慢性骨髓炎的防治具有一定的应用前景，但在抗生素的选择和使用方法 上仍有待进一步研究。 随着开放性交通伤的频繁发生，创伤后骨髓炎的发生日益增加，同时骨科内固定和人工 关节感染所致的慢性骨髓炎也在随着这些固定器械的广泛使用而有所增加。但迄今为止，慢 性骨髓炎仍是临床医师面临的一大难题，通常需要长期抗生素和多次手术治疗，严重影响患 者的生活质量[1] 。由于慢性骨髓炎感染局部瘢痕增生，常规静脉注射抗生素往往难以在骨感 染局部形成高浓度。本研究旨在探讨脂质体作为新型抗生素释药载体，对慢性骨髓炎的治疗 作用。 1 材料与方法 1.1 细菌来源及培养：选择耐药金黄色葡萄球菌（ATCC 29213 ）作为本研究的病原体。该菌 种来源于成都军区昆明总医院检验科。采用 Mueller-Hinton （MH ）琼脂涂板后37℃培养 18h，挑取单一菌落，MH 肉汤中振荡培养过夜，于紫外分光光度计下测定 530nm 的吸 6 CFU/ μl，4 ℃保存。 光度值，并计算细菌浓度。采用 MH 肉汤将上述菌液稀释至 1.2×10 1.2 不同脂质体抗生素的构建：按照 Ravaoarinoro 等人描述的方法制备脂质体[2] 。主要试剂 包括：卵磷脂、十八胺、胆固醇（阳离子脂质体）；卵磷脂，L α 磷脂酰基 DL 甘油，胆 固醇（阴离子脂质体）；卵磷脂，胆固醇（中性脂质体）。对于带电荷脂质体而言，三 者试剂的比例均为：7:2:1 ；而中性脂质体的两种试剂比例为：7:1 。各种试剂按照上述比 例混合后，分别以氯仿为溶剂溶于圆底烧瓶中，40 ℃真空中旋转蒸干制成干膜。将 120 mg 庆大霉素溶于 6 ml PBS 中，使其浓度为20 mg/ml ，将阳离子脂质体浸泡于 55℃上述庆 基金项目：云南省 2007 年社会发展科技计划应用基础研究面上项目（2007C251 ） 大霉素溶液中，搅拌 1h，超声处理40s ，低温高速离心去除未被包裹的庆大霉素，并计 60Co 辐照灭菌，4 ℃保存备 算包封率（包封的庆大霉素/包封前庆大霉素总量×100％）。 用（1w 内用完）。 1.3 不同脂质体庆大霉素药敏实验：采用琼脂稀释法检测三种不同脂质体庆大霉素和庆大霉 [3] 素的最小抑菌浓度 。 1.4 兔胫骨慢性骨髓炎模型的建立：选用 6 个月龄健康新西兰大白兔 41 只，体重 2.25～2.60 kg ，雌雄不限（昆明医学院实验动物中心提供）。单独饲养，标准进食。 兔称重后于耳缘静脉注射苯巴比妥（30mg/kg ）和氯胺酮（10mg/kg）进行麻醉， 左下肢去毛，四肢固定于手术台。碘伏消毒左下肢，切开胫骨近端皮肤，暴露胫骨骨面， 采用 3mm 直径克氏针钻孔，微量注射器先后注入 5 μl 鱼肝油酸钠和 5 μl 耐药金黄色葡 6CFU ），骨蜡封闭钻孔后缝合皮肤。对照组注入 5 μl 鱼肝油 萄球菌（注射总量为 6 ×10