细胞微生理计在药物分析中的应用.pdfVIP

STC’99 细胞微生理计在药物分析中的应用4 李蓉严伟民王平· t 浙江大学，生命科学与医学工程学系，杭州，310027 email ￡n叠盥如g@m盆jj土五匀。￡n 麓要： 塞 本文研制了一种细胞传感器微生理汁，用于药物分析和其筛选。我们研究了黄 芪、枸杞和川芎对乳鼠肾细胞代谢的影响。并进行了一系列实验，结果表明，利用 该传感器可开发出用于生物细胞和组织生长及变化检测的新一代细魄微生理计系 统，从而通过细胞分泌的酸性代谢产物估计药物作用的大小，以及其对细胞代谢 的正负效应等，在生物医学领域具有广泛应用前景。 1·前言 奉文描述了硅技术在生物学中的应用；在基于硅传感器上集成活细胞，形成 一个仪器，通过细胞生理反应检测细胞环境中的分子变化。此仪器称为微生理计， 在构造上又称为细胞传感器，它不同于其他分折仪器。它不是用于确定被分 ● I l_==． l= {L‘r怖■‘■●■化l I t 图l细胞外酸化的细胞事理学 ·联系人 #本文得到国家自然科学基金资助f批准号 STC’99 析物的特殊性质，例如；电泳、核磁共振积免疫测定，徽生理计确定的是被分析 物对生物细胞功能的影响。抉句话说，它是一个完成生物溅定的系统。它可以看 作是探查细胞和组织生长、测定生物化学变化的技术及测量跨膜电位、电流变化 的技术．除少数情况外，通常细胞由于能量代谢产生酸性产物丽使环境酸化，通 过鸵量代谢的方式产生的ATP是与细胞ATP的消耗紧紧偶联的，因此细胞的生 毒 理变化将引起能量使用率的变化，从而引起细胞酸化率的变化。在大多数情况下． 这种变化足班方便地用微生理计进行测定【1】f2】。 2．生物学基础 图1简要地显示了以葡萄耱作为碳源的含有各种要素的哺乳动物细胞中质子 产生和排出的主要细胞代谢机制。它进～步阐明了配位体．受体交互作用是怎样调 整这些过程的。 3．细胞徽生理计实验系统 图2细胞传感器微生理计的结构图 图2为美国分子器件公司采用的细胞传感器微生理汁的结构图，本文采用与 其相类似的结构。在测量灌流腔。p，将活细胞上的盖膜紧贴换能器，以得到徽体 积的灌流腔：在这个相当小的环境中，可以测量到与细胞活性相联系的pH值变 化量。在盖膜与换能器之间插入一个薄隔离层(典型厚度为50．2501．tin)，实验进 行时的灌流腔体积为60DI。帽配的液动循环管路以一个电控液泵为基础，持续不 断地更新细胞介质，使其进入微体积腔中。为了确保生物样品处于最佳状态，营 养成分和测量腔都僳持恒温在37。C。 惫 4．莪据测定及分析 t联系人 #本文得到国家自然科学基金资助(批准号 312 盯f、t∞ 拐点和倾斜角u；这些参量将放用束定义电压读数与将显示的实际值之问的比例