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均匀实验设计优选亚心形扁藻培养基∗ 刘远 大连水产学院海洋环境工程学院 大连 (116023) E-mail：liuy8848@126.com 8 摘 要：以均匀实验设计方法优化亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)培养基，采用U10*(10 ) 均匀设计实验考察氮、磷、缓冲体系(Tris-HAc)3 因素对亚心形扁藻生长的影响，同时也考察了 - 3 与其光合作用相关的藻液pH 的变化。结果表明：在NO3 -N 9.5 mmol/L ，PO4 -P 0.34 mmol/L ， Tris-HAc 6.7 mmol/L 优化条件下亚心形扁藻生长迅速，15d藻细胞增殖到(8.28±0.51)×106 cells/mL。Tris-HAc体系能够维系藻细胞在最优pH条件下增殖，高浓度氮源利于促进藻细胞生长。 关键词：均匀设计，亚心形扁藻，光能利用效率，培养基 中图分类号：Q949.2 1. 引言 亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)是一种海洋微藻，属绿藻门、绿藻纲、团藻目、衣 藻科、扁藻属，个体较大，长11~16 µm，宽7~9 µm，厚3.5~5 µm[1] 。因其富含蛋白质、脂肪等 营养物质，易被水产动物幼体摄食消化，是水产动物育苗过程中的优质饵料。另外，本实验室 首次发现此藻在胁迫条件下可利用太阳能光解海水制氢[2] 。所以亚心形扁藻在水产养殖及生物 能源方面均有广阔的应用前景，备受国内外关注。 目前，亚心形扁藻规模化培养存在的主要问题是藻细胞生长缓慢，倍增时间长。合适培养 基是实现亚心形扁藻高密度培养的重要因素之一，国内报道的扁藻培养基[3] 中加入大量 - 2- NaHCO3 ，由于藻细胞光合作用使大量HCO3 转化为CO3 ，培养液有时混浊沉淀，阻碍藻细胞 [4] 6 存活生长。国外Fábregas等 发明一种扁藻的培养基使之增殖最高密度为7.83×10 cells/ml ，但其 光生物反应器结构复杂、价格昂贵，制约其广泛应用。探索简易条件下实现高密度培养亚心形 扁藻细胞尤显重要。 均匀设计是王元和方开泰于1978年提出的。该方法最大优点是一次试验可安排多因素、多 水平，使试验点在试验范围内均匀分布，减少试验次数，获得更多试验信息，广泛应用于寻找 最优工艺条件和最好的配方[5] 。本文采用均匀实验针对与藻细胞增殖相关的氮、磷、Tris-HAc 体系优化培养基配方，以期得到亚心形扁藻高密度培养的培养基，实现其在简易反应器条件下 快速增殖的目的。 2. 材料和方法 2.1 藻种 亚心型扁藻(Platymonas subcordiformis) 由辽宁省海洋水产研究院提供，并在实验室纯化得 到单克隆藻落后使用。 2.2 培养液、培养条件 [6] 海水取自大连周边海域，砂滤后以110 ℃高压灭菌。冷却至室温后，加入康维方 营 *本课题得到国家高技术“863”计划(编号：2006AA052106)资助。 - 1 - 养盐，使各种营养组份含量(mg/L)为：1.3 FeCl ，0.36 MnCl ，33 H3BO ，