共聚焦激光显微镜在药剂学中的应用.pdfVIP

药物生物技术 Pharmaceutical 2008，15(1)：6871 68 Biotechnology 共聚焦激光扫描显微镜在药剂学中的应用 赖丽芳，郭红霞’ (山东大学药学院药物制剂研究所，山东济南250012) ． 摘要共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)是近年来一项新的、快速发展的、对样品无损害的成像技术。文章介 绍了CLSM的基本原理，并参阅具有代表性的最新文献，分析和讨论了CLSM在药剂学研究领域的应用。随着 CLSM技术的进一步发展和完善，它必在药学研究各领域发挥更大作用。 关键词共聚焦激光扫描显微镜；经皮和粘膜吸收；细胞水平；微粒结构；药物成型机制和释药机制 中图分类号：R94 文献标识码：A 文章编号：1∞5—8915(2008)01—0068—04 自从1980年Petran等[1]发明共聚焦激光扫描显微镜径为71rlln时在皮肤中荧光强度最大，CF脂质体粒径为 以来，CLSM受到了广泛的关注，其在医学、生物学、药学研 120nrfl时能更好地促进皮肤的渗透。Verma等[6]在研究 究等方面得到了广泛应用。CLSM的主要原理[2．3]是：利 以脂质体为载药系统将药物运载至皮肤的机制中，将脂质 用激光扫描束通过光栅针孔形成点光源，在荧光标记标本 体用CF标记后，用CLSM技术可得到CF经过预定的时 的焦平面上逐点扫描，采集点的光信号通过探测针孔到达 光电倍增管(PMT)，再经过信号处理，在计算机监视屏上C礤IM研究以米诺地尔为模型药物制备的短链醇类的磷脂 形成图像。CLSM采用共聚焦技术在物镜的焦平面上放置 脂质体及普通脂质体的透皮效果，结果发现短链醇类的磷 了1个带有小孔的挡板，平面以外的杂散光被挡住，消除了 脂脂质体的透皮数量及深度均高于普通脂质体。CLSM不 球差，并进一步消除了色差，且可将样品分解成二维或三 用对样品进行冻结固定就能直接观察，且能穿透皮肤深层 维空间上的无数点，用十分细小的激光柬(点光源)逐点逐 进行观察．所以被广泛地应用于亲水和亲脂标记物在皮肤 行扫描成像，再通过微机组合成1个平面的或立体的图像。 中的显像及标记物强度的分析中。 CLsM的主要优点有[1]：共聚焦图像反差大、清晰度 1．2 a．SM应用于微粒粘膜吸收研究 高、定位准确，克服了荧光显微镜照射面积大、层面不清、 近年来，胶体载药系统由于能延长药物在血液中的循 定位不准等缺点。使用共聚焦激光扫描显微镜不会损坏 环时间而备受关注。其中将生物可降解的纳米粒用聚乙 样品，可用于活细胞的研究，不需进行样品前预处理，能很 二醇(PEG)包衣是一个很有前景的载药系统。与未包衣的 好地再现样品的真实情况。而且CLSM对于相对较厚的 聚乳酸(PLA)微粒相比，PEG长循环微粒被单核巨噬细胞 样品可以逐层地获得物体光学横断面的图像，得到样品的 摄取的量有所降低。PEG长循环纳米粒不仅能延长药物 三维图像，提供比传统显微镜更详尽的样品信息。目前在 药剂学领域主要应用于药物经皮和粘膜吸收的研究、粘膜 循环时间，Tobio等【8．9]发现它还能影响PLA纳米粒与生 吸收促进剂作用机制的研究、药物的细胞摄取、穿透性能 物膜表面诸如鼻粘膜及肠粘膜的相互作用，是粘膜给药的 及与细胞