蛋白质组学的研究中的核心技术.pdfVIP

( ) 现代医学 Modern Medical Journal ,2004 年 8 月 ,第 32 卷 　第 4 期 2·11 · ·专家论坛· 蛋白质组学研究中的核心技术 ———双向凝胶电泳 张 　曼 (北京铁路总医院 临床检验中心 ,北京 　100038) 　　[ 关键词] 双向凝胶电泳 ;蛋白质组学 ;肿瘤 ;致病微生物 ( ) [ 中图分类号] R446. 1 　　[文献标识码] C 　　[文章编号] 2004 　　人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于 替代的作用 ,结合质谱鉴定技术可查明大型蛋白复合 2001 年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣 物各组组分 ,与其他生物技术如分子生物学、分子遗传 布 ,他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱 , 工程、免疫学、微量蛋白质的自动氨基酸序列分析相结 至此 ,人类基因组计划已基本完成 ,随着后基因组时代 合 ,可以快速准确地发现和鉴定新的蛋白质。 的到来 ,蛋白质组学得到了空前的发展 ,蛋白质组研究 1 　双向电泳技术应用过程中的关键步骤 旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质 ( ) 的表达规律和生物功能。包括蛋白质组、蛋白质组学、 1. 1 　样品制备 蛋白提取 功能蛋白质组学和结构基因组学等新的概念的提出 , ( ) ( ) 1 细胞培养、处理和收集 ; 2 将细胞在 IEF 裂解 蛋白质组学已成为当今生物领域中极其活跃的学科。 缓冲液中溶解 ; (3) 将样品离心以去除不溶的细胞碎片 ( ) 其中双向电泳 twodimensional electrophoresis ,2DE 是 和 DNA ,提取上清 , - 80 ℃保存。 ( 蛋白质组研究的三大关键核心技术之一 另两种是质 1. 2 　蛋白质定量和上样 ) ( ) ( 谱技术和蛋白质组信息学 。由于双向电泳技术在蛋 1 固相 pH 梯度干胶条 immobiline pH gradient , ) ( ) ( ) 白质组与医学研究中所处的重要位置,它可用于蛋白 IPG 水化、等电聚焦 ; 2 IPG 的平衡; 3 SDSPAGE