第五章 转录.doc

第五章 转录 转录（transcription）是以DNA为模板，在依赖DNA的RNA聚合酶的催化下，以4种rNTP（ ATP、CTP、GTP和UTP ）为原料，合成RNA的过程。转录是DNA将遗传信息传递给蛋白质的中心环节。在有些RNA病毒中，RNA也可以指导RNA的合成。转录起始于RNA聚合酶和启动子(promoter)结合之后，转录起始的第一个碱基称为转录起始点(start point) 。在RNA聚合酶的作用下合成RNA，至终止子(terminator)终止。由启动子到终止子之间的序列称为转录单位(transcription unit)。转录起始点前面的序列称为上游(upstream)，后面的序列称为下游(downstream)。 第一节 转录酶和转录因子 一、原核生物的RNA聚合酶。 大部分原核生物的RNA聚合酶的结构十分相似，在聚合酶的表面形成一条约2.5nm的通道，是容纳DNA分子的场所。细菌RNA聚合酶的大小约为9.5nm (9.5nm ( 16nm。1. 大肠杆菌RNA聚合酶。大肠杆菌RNA聚合酶由多亚基组成，全酶组装过程为(2+( +(’+( ，分子量为480 KDa。(亚基与全酶结合疏松，很容易与全酶分离。全酶可以起始RNA的合成，之后(亚基从全酶解离下来。(亚基可能参与全酶的组装及全酶识别启动子。另外， (亚基还参与RNA聚合酶与一些转录调控因子间的作用。(亚基具有与底物（NTP及新生的RNA链）结合的能力。利福霉素可以阻断转录的起始，链霉溶菌素可抑制延伸反应，二者均是通过与(亚基的结合而发挥作用的。(’亚基可能与模板结合。肝素可与(’亚基结合而抑制转录，并且可以和(’亚基竞争DNA的结合位点。(亚基和(’亚基提供了RNA聚合酶的活性中心，其一级结构与真核生物RNA聚合酶大亚基有同源性。(亚基的功能是帮助全酶识别启动子并与之结合。 (亚基也可被看作一种辅助因子，因此又可称为(因子（ ( factor）。在转录过程中，RNA聚合酶需要与其他蛋白质辅助因子（转录因子）共同作用，才能保证转录的顺利进行。如转录终止时的终止因子和抗终止因子。大肠杆菌RNA聚合酶多亚基的复杂结构主要是为酶提供了与多种因子相互作用的能力，从而可以识别多种启动子。 2. (因子。RNA聚合酶要负责所有基因的转录，也就是说要识别所有转录单位的启动子。因此， (因子在RNA聚合酶识别启动子的过程中起关键作用。(因子的二级结构属于(螺旋，是通过识别启动子上的某一序列来控制RNA聚合酶与启动子的结合的。目前已发现了至少4种(因子。在细菌受到外界环境的急剧影响时，会改变所表达的基因，产生(因子更替的现象。如环境温度升高时，大肠杆菌会开启rpoH基因的表达， 其产物(32能识别热激基因的启动子，而正常状态下表达的基因会关闭或表达水平下降。芽孢菌生活周期过程中生活方式的改变也是通过(因子的更替完成的。 二、真核生物的RNA聚合酶。 在真核生物细胞中，共有三类RNA聚合酶，即RNA聚合酶Ⅰ、RNA聚合酶Ⅱ 和RNA聚合酶Ⅲ。它们对鹅膏蕈碱（(-amanitine）的敏感性不同，在细胞核中的定位也有差异。RNA聚合酶Ⅰ位于核仁，活性所占比例最大，负责rRNA（5.8S、18S和28S）的转录。 RNA聚合酶Ⅰ负责了大部分细胞RNA的转录。RNA聚合酶Ⅱ位于核质，活性所占比例仅次于RNA聚合酶Ⅰ，主要负责核内不均一RNA(heterogenous nuclear RNA, hnRNA/ mRNA前体）的转录。RNA聚合酶Ⅲ也位于核质，活性所占比例最小，负责tRNA、5SRNA、Alu序列和其他小RNA的转录。真核生物的RNA聚合酶的分子量都很大，由8至14个亚基组成。经纯化的RNA聚合酶具有以DNA为模板合成RNA的能力，但不能正确地选择启动子。目前尚不能完成RNA聚合酶的体外重建，无法确定哪些亚基是活性所必需的。 第二节 启动子 启动子(promoter)是指DNA分子上被RNA聚合酶识别并结合，形成起始转录复合物的区域。启动子上还包括一些调节蛋白因子的结合位点。启动子是控制转录起始的序列，并决定着某一基因的表达强度。与RNA聚合酶亲和力高的启动子，其起始频率和效率均高。 一、原核生物的启动子。 在原核生物的基因组中，能够被RNA聚合酶识别的最小DNA片段为12 bp。研究启动子特性的方法之一是比较不同启动子的序列，从中发现一些同源性比较强的部分，又称为保守序列。1. 原核生物启动子的结构。在原核生物的启动子中有4个区域：转录起始点、－10区、－35区、－10与－35之间的序列。转录起始点：转录起始点在多数情况下为嘌呤，常见的序列为CAT，A为转录起始点。－10区：在转录起始点的上游有一个6 bp的保守序列，几乎在目前已知的所有启动