提高肾小球基底膜PAMS染色法质量技巧.pdfVIP

201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 使涂片均被红细胞所覆盖，给细胞学诊断带来困难，特别是含血甚多，癌细胞又很少时，红 细胞会将很少的癌细胞所掩盖，致使细胞学诊断造成漏诊。为此，经反复实验，采用溴化十 六烷基三甲胺对血性标本进行溶血，使肿瘤细胞显示更加清晰，克服了背景模糊的现象，从 而提高了血性标本中癌细胞的检出率，对肿瘤的细胞学诊断具有较高的使用价值。 1材料与方法 1．1标本含血的胸腹水标本，分别制作两张涂片，一张设为溶血剂处理组，另张为不处理组。 monium bromide分析纯分子 1．2溶血剂的配制溴化十六烷基三甲胺59(Cetyltrimethylan 可使用。 1．3制片方法①一种方法：取血性标本适量(一般5．10m1)，倒入离心管内，逐滴加入溶血 剂，边滴边振荡试管，至血液完全溶解为止。而后离心5min，倾去上清液，取离心管底部 沉淀物涂片或用离心涂片机甩片。待涂片微干后，95％酒精固定，常规HE染色，镜检。② 二种方法：取血性标本适量(一般5．10m1)，倒入离心管内，离心后，取沉淀物涂片，待涂 片晾干后，将该涂片直接放入溶血剂内处理lmin，水洗后行常规HE染色，镜检 2结果 溶血剂处理过的涂片背景较干净，细胞染色鲜艳，结构清晰；未处理过的涂片背景模糊 不清，较脏，细胞结构显示不清(图l，2) 3讨论 3．1溴化十六烷基三甲胺为阳离子表面活性剂，具有增溶作用，作为溶血剂，对红细胞处理 较完全，应用中我们还发现它可使癌细胞聚集，对提高血性胸腹水标本的检出率具有重要意 义。此溶血剂对肿瘤细胞及正常细胞均无任何影响，并可使肿瘤细胞的显示更加清晰。 3．2加入溶血剂的量，要根据标本含血量的多少而定。 3．3使用此法处理的涂片进行免疫组化染色可消除由于红细胞染上红褐色，而造成假阳性的 现象。 3．4应用此法简便、快速，对胃癌、肠癌、肺癌及肝癌等疾病的细胞学诊断具有较高使用价 值。 19．提高肾小球基底膜PAMS染色法质量的技巧 田玉旺李琳朱红艳苗金红邢宜 北京军区总医院病理科 在肾小球疾病的病理诊断中，观察与研究肾小球基底膜的改变具有极为重要的诊断价 Acid．Silver 值。显示肾小球基底膜多采用PAMS(PeriodicMethenamine)染色法，应用过程 中，发现传统的PAMS肾小球基底膜染色法染色效果不佳，基底膜染色显示较浅，背景较 深，染色时间过长。我们经大量实验，对染液的配比、染色时间、染色孵育温度等进行了调 整，收到较好的染色效果。 l材料和方法 1．1标本 选取本院临床肾穿刺活检组织标本，10％中性福尔马林固定，常规组织脱水、透明、浸 蜡，石蜡包埋，切片厚度为2-3I_tm。 1．2六胺银染色液的配制 取3％环六亚甲基四胺水溶液50ml，加入5％硝酸银水溶液6ml，此时溶液变为乳白色 悬浊液，振荡后待溶液变为清亮透明或略呈乳白色时，加入5％四硼酸钠水溶液4ml。 加 201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 1．3染色步骤 ①切片脱蜡至蒸馏水；②2％高碘酸水溶液处理1旺15mira③蒸馏水洗2次，每次lmin； ④切片浸入水浴箱中预热至900C的六胺银染色液中，孵育约20min(镜下以肾小球基底膜 呈黑色，而背景呈棕黄色为宜)；⑤切片蒸馏水洗2次，每次lmin；⑥0．2％氯化金水溶液调 色l一2min；⑦蒸馏水洗；⑧2％硫代硫酸钠水溶液处理2rain，自来水洗；⑨用苏木精或伊 红复染；⑩梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。 2结果 肾小球及肾小管基底膜呈黑色，细胞核呈蓝色，细胞浆呈粉红色(图l，2)。 3讨论 构成肾小球毛细血管、球囊壁以及肾小管的基底膜是一层高度含水性凝胶体的衬膜，主 要由粘多糖和蛋白质构成，而以糖类更为丰