东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血吸虫病免疫效果观察.pdfVIP

东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血 吸虫病免疫效果观察 宋震宇1,2刘金明2t，何金桃”，孙帅2，石耀军2，李浩2，陆珂2，林矫矫2，岳城1 1．新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052；中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸 虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海20(；241) 摘要：我们在前期研究中利用东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬茵体展示eDNA文库，获得10个阳 性克隆。本文选择其中的8个噬菌体克隆单独或联合免疫BALB／e小鼠，观察对日本血吸虫病的免疫预 防效果，以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因。和空白对照组相比，展示血吸虫辞指蛋白的1 得到验证。研究结果提示，日本血吸虫环状锌指蛋白(1号克隆)编码基因在疫苗方面具有重要研究价值。 关键词：日本血吸虫；噬茵体展示抗原；免疫；小鼠 日本血吸虫病(Schistosomisisfaponica)是一种严田鼠均具有抗血吸虫能力”。如能筛选出与东方田鼠 重危害人畜健康、影响经济和社会发展的寄生虫病。虽 天然抗性相关的血吸虫靶基因或分子，对抗日本血吸 然国家和地方政府投入了大量人力、物力，血防工作取 虫疫苗和治疗药物研究都将有重要参考价值。本课题 得了举世瞩目的成就，但到2007年年底，全国仍有血组根据东方田鼠对日本血吸虫感染具有天然抵抗力这 驳虫病人51．5971万哪．以各省疫区牛血吸虫病的感染一特性以及噬菌体展示技术的特点，在构建日本血吸 率和存栏量【t推算，我国仍有病牛4．6万头左右，防治 虫成虫噬菌体展示eDNA文库“的基础上。利用东方田 形势依然严峻。由于钉螺分布广泛，滋生环境复杂，控 鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示eDNA文库。 制难度大；易感宿主多，病源扩散严重；病人、病畜治疗 获得多个可能与东方田鼠抗血吸虫抗性相关的靶基 后再感染严重，防治效果难以巩固日，仅仅依靠现有的 因Iq。本文以展示这些基因的噬菌体进行免疫预防实 防治手段，要最终在我国控制和消灭血吸虫病难度极 验，寻找其中具有开发为疫苗潜力的抗原编码基因，为 大0开发有效的抗血吸虫病疫苗是控制血吸虫病的一 研制抗疫苗创造条件。 个重要策略。虽然已找到了一些有希望的候选疫苗分 1材料与方法 1．1材料 于，如Sj23ro和si28w，但他们单独使用所诱导的保护 力还难以达到现场防治的需求，需要继续筛选新的候 噬菌体克隆及宿主菌：选择本实验室用东方田鼠 递交苗分子。19世纪60年代初，我国学者在血吸虫病血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示eDNA文库获得 疰区调查了上万只东方田鼠(M／crotuj加以)，均未发 的1—8号克隆，其中1号克隆展示的EST序列为日本 现血吸虫成虫和虫卵。近年来，我国学者进一步通过实 驻感染验证实验室繁殖的东方田鼠和来自非疫区东方 AY2229091)的92～661 bp核苷酸序列，2号克隆展示 蜒￡项目：国家高技术研究发展计划(863计划)(2006AAlOh207) I作者简介】宋震宇(1983一)，女，新疆乌鲁木齐人，硬士研究生，主要从事血吸虫分子生物学研究。 ’通讯作者：hd：jim。,liu48@126．c嘲．电话：021 的EST序列与类人猿锌指蛋白编码基因(GenBank登 陆号为XM_509571。2)有82％同源性．3号和4号克隆养箱中倒置培养3卅h，计数平板上的噬菌斑数。}} 展示的EST序列分别为日本血吸虫SJCItGC04485 噬菌体的实际滴度：噬菌体的实际滴度(p“m1)：嗷 (GenBank登陆号为AY813888．1)和SJCHC,C02365 斑个数xlOx稀释倍数。同时将该噬菌体用1xPBs (GenBank登陆号为AYSl