表达V5表位重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会论文集 表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其 生物学特性鉴定 黄立平，陆月华，危艳武，郭龙军，吴洪丽，张飞雁，付玉洁，刘长明丰 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001) 摘要：为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性，本研究构建了以PCV2基因组为骨 25 株经细胞连续传10代，体外培养增殖性能稳定，毒价可达106TCID舭nL。拯救的带有V5表位标签的重组 PCV2毒株，为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台。 关键词：猪圆环病毒2型；V5表位；标记毒株；生物学特性 1991年，加拿大首次报道了一种新的称为断奶制，ORF2编码病毒的衣壳蛋白(Cap)，参与病毒 的组装、感染和免疫等过程。由于PCV2基因组太 仔猪多系统衰竭综合征(PA厦ws)的病症，该病可 发生于健康状况良好的猪场，以5～12周龄的猪发 小，因此对于基因组的操作仅局限于碱基的替换， 病率较高，临床主要表现为生长迟缓、进行性消 瘦、呼吸困难、贫血、黄疸和腹泻等。急性暴发猪 群的死亡率可达lO％，个别情况可高达50％，经鉴病毒的免疫原性和致病性进行了一系列研究，研究 定猪圆环病毒2型(PCV2)是该病的致病原It]。 PCV2不但是PMWS的病原体，而且还与其他几种PCVl相应基因所拯救的嵌合病毒能够诱导猪产生 病症有关，如猪皮炎与肾炎综合症(PDNS)、猪繁 针对PCV2．Cap蛋白特异性抗体，且致病性大大降 殖障碍、猪呼吸道疾病综合症(PRDC)、坏死性淋 巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等。现将与 PCV2．ORF2缺失序列构建和拯救一系列的 PCV2有关的疾病统称为猪圆环病毒病(PCVD)【21。 猪圆环病毒2型属于圆环病毒科(Circoviridae) PCV2基因组ORFl编码区末端替换2个碱基，形成 圆环病毒属(Circovirus)的成员。它是一种无囊 了一个SM 膜、20面体对称的病毒，直径只有17nlll，其基因 I限制性内切酶序列，拯救了一株具有 组由闭合环状单链DNA组成，全长1766～1768nt， 分子标记的毒株。为了研究PCV2．Cap蛋白承载外 主要包含两个开放阅读框架(ORE)，ORFl编码病源表位的可行性，将源自于猴副流感病毒(Simian virus 毒复制酶相关蛋白(Rep和Rep’)，参与病毒的复 基金项目：国家自然科学基金项目；中央级公益性科研院所基本科研业务费(2010-054) 作者简介：黄立平(1980．)，女，天津武清人，博士研究生，从事猪圆环病毒分子生物学研究． +通信作者：E-mail：lcm@hvri．ac．Oil 一90— 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会沦文集 Cap蛋白的C-末端．构建‘株带有表位标签的重组物，按10％接种量同步)JtlA．到新消化的PK-I5细胞 病毒，能够用PCR和血清学方法与亲本毒株鉴别。 悬液巾，37℃静置培养24h形成单层，按文献『71 方法进行D氨基葡萄糖处理．收取病毒培养物经3 1材料和方法 次冻融后传代。 表I构建厦鉴定重组毒株所用PCR引橱 l砧lel 11病毒、细胞、抗体、载体、菌株殛试剂 mo删imm