聚丙烯酰胺电泳条带中微量DNA片段de回收与再扩增方法de改进.pdfVIP

华南农业大学学报 2015，36(2)：117—120 http：／／xuebao．scau．edu．cn JournalofSouthChinaAgriculturalUniversity doi：10．7671／j．issn．1001—411X．2015．02．021 许美容，贾奥琳，郑 正，等．聚丙烯酰胺电泳条带中微量DNA片段的回收与再扩增方法的改进 [J]．华南农业大学学报，2015，36(2)：117． 120． 聚丙烯酰胺 电泳条带中微量 DNA片段的 回收与再扩增方法的改进 许美容 ，贾奥琳 ，郑 正，邓晓玲 (华南农业大学 资源环境学院，广东广州 510642) 摘要：【目的】研究聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)条带中微量DNA片段的回收和再扩增．【方法】比较了4种方法溶 解聚丙烯酰胺凝胶的效果和回收微量核酸的效率．【结果和结论 】Bioteke溶胶／结合液能获得极高的DNA片段回收 率，可从仅含 1．0～7．5ng核酸的PAGE胶中有效回收到足量的片段；再扩增的效果与回收效率呈正相关；将液态 7昆合液与杂质分离是成功进行再扩增的关键．本研究构建的一套快速 、高效的PAGE多态性条带回收及再扩增的 方法为分析生物遗传多样性成因提供了新途径． 关键词：聚丙烯酰胺凝胶 电泳；微量DNA带回收；DNA片段再扩增 中图分类号：Q7 文献标志码：A 文章编号 ：1001—411X(2015)02—0117—04 ImprovedmethodstorecoverandreamplifytraceDNA fragments from thepolymorphicPAGE band XU Meirong ，JIA Aolin ，ZHENG Zheng，DENG Xiaoling (CollegeofNaturalResourcesandEnvironment，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China) Abstract：【Objective】TooptimizethemethodsofrecoveryandreamplificationoftraceDNAfragments frompolymorphicpolyacrylamidegelelectrophoresis(PAGE)bands．【Method】Effectsoffourmethods ofdissolvingpolyacrylamidegelandrecoveryefficienciesoftracenucleicacidswereobtained．【Result andconclusion】Dissolving／BingbufferrfomBiotekekitshowedhighrecoveryratesofDNAfragments from PAGE gelswithonly1．0—7．5ngnucleotide．Effectsofamplificationpositivelycorrelatedwithre- coveyyefficiencies．Theseparationofliquidmixtureandimpuritieswasthekeytosuccessfulamplifica- tion．Thisresearch formsafast，efficientDNA recyclingandamplificationmethodrfom polymorphism PAGE，whichprovidesanew approachtoanalyzethecausesofgeneticdiversity． Keywords：PAGE；traceDNA fragmentsrecovery ；reamplificationofDNA sequence 琼脂糖凝胶 电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Poly— PAGE因具有适用性广、分辨率高、上样量小、通量较 acryl