腺病毒%2f甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2系统评价.pdfVIP

第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) 孙元，田大勇，孟其麟，赵碧波，王春花，李素，仇华吉+ (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，哈尔滨150001) 摘要：猪瘟是一种非常重要的猪传染病，对养猪业危害极大。具有标记特性的新型猪瘟疫苗及相应的鉴别诊断方法将 会对猪瘟的防控起到重要的作用。先前我们证实，构建的表达猪瘟病毒E2基因的腺病毒／甲病毒复制子嵌合载体病毒 rAdV—SFV—E2在猪体上可诱导高水平的猪瘟特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，免疫攻毒的保护效果与猪瘟兔化弱毒疫苗C 株相当。为了进一步评价该嵌合载体病毒的免疫效果及作为理想猪瘟疫苗的可能性，我们又从对靶动物及非靶动物安全性、 不同免疫次数、不同免疫剂量、抗腺病毒载体抗体干扰、猪瘟母源抗体干扰及与其它疫苗联合免疫方面，对该腺病毒／甲病毒 复制子嵌合病毒rAdV-SFV-E2进行了综合性评价。研究结果显示，该嵌合载体病毒对靶动物猪及非靶动物家兔和小鼠高度安 全，免疫后没有任何副反应和组织病理学变化。rAdV-SFV-E2以6．25×105TCID，。免疫后能够完全抵抗猪瘟病毒强毒的攻击； 当存在猪瘟母源抗体，且抗体阻断率在60％P强上时，嵌合载体猪瘟疫苗rAdV—SFV—E2正常免疫后，抗体水平逐渐上升，并于 二免后4Ⅳ达到峰值，随后趋于稳定，攻毒后所有免疫猪均获得了完全保护，而猪瘟母源抗体阻断率在60％左右的非免疫猪， 3～4W抗体水平降到了阴性临界值以下(抗体阻断率300／o以下)，攻毒后所有猪均未得到保护，并于攻毒后10d左右全部死 亡；rAdV-SFV-E2一次免疫后，于攻毒前一直没有检测到猪瘟特异性抗体，但是攻毒后所有猪均没有出现猪瘟临床症状，攻 毒后6 响各自的免疫应答，所有免疫猪均产生了高水平的猪瘟抗体和伪狂犬病抗体，并对猪瘟病毒的攻击提供了完全的保护； rAdV—SFV—E2免疫后不影响再次免疫和其它腺病毒的免疫；BVDV抗体不影响该嵌合载体病毒的增殖。本研究进一步证实了腺 病毒／甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗作为一种理想猪瘟疫苗的可能性，将会对猪瘟的防控起到重要的作用。 关键词：猪瘟疫苗：嵌合载体病毒；免疫效力：系统评价 et 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性传染性疾病，被OIE列为OIE疫病名录(Moenniga1．， 2000)。目前，最有效、最常用的猪瘟疫苗主要以弱毒疫苗为主，如猪瘟兔化弱毒疫苗C株。尽管猪瘟弱毒 疫苗安全，且能够诱导高水平的中和抗体，并对高致病性的猪瘟病毒的攻击提供完全的保护。但是猪瘟弱 毒疫苗具有一些缺点，由于生产工艺的原因，猪瘟弱毒疫苗产品中经常会污染其它瘟病毒，弱毒疫苗能够 在淋巴器官中进行有限的复制。另外，经疫苗免疫产生的抗体与猪瘟病毒感染所产生的抗体无法进行区分 (仇华吉等，2005)。猪瘟母源抗体对仔猪早期抵抗病毒的攻击起到重要的作用，但是免疫程序不当通常引 起免疫失败。猪瘟弱毒疫苗与其它疫苗联合如伪狂犬病疫苗、蓝耳病疫苗免疫时会相互干扰，常常导致免 疫失败。为了克服这些缺点，急需研制一种安全、高效且能够区分免疫与感染的新型猪瘟疫苗。 本研究中构建的腺病毒／甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗在猪只上诱导了消除性免疫，能够对猪瘟病毒 强毒株的攻击提供完全的保护，免疫效果与猪瘟兔化弱毒C株相当，由于其只含有猪瘟病毒主要免疫原性 基因E2基因，因此可以用于区分免疫接种与野毒感染。由于该嵌合载体疫苗结合了腺病毒载体高效递送及 甲病毒复制子高效表达外源基因的特点，使得此类疫苗的免疫剂量大大减少，具有广泛的应用前景。为了 验证该腺病毒／甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV—SFV—E2可作为一种理想的猪瘟疫苗，本研究从安全性、 不同免疫次数、不同免疫剂量、抗腺病毒载体抗体干扰、猪瘟母源抗体干扰及与其它疫苗的联合免疫方面， 对其进行了综合性评价。 1材料和方法 1．{ 疫苗、病毒表达猪瘟病毒石门株E2基因的腺病毒／甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV—SFV—E2由 et 本实验室构建(Sun 基金项目：国家863计划(201l从loA208) 作者简介：孙元(1980一)，男，黑龙江桦南人。博士，主要从事猪瘟新型疫苗研究 通讯作者，仇华吉，研究员，主要从事猪瘟病毒研究，E-mail：huajiqiu@hvri．ac．CIl