亚细胞蛋白质组学的研究.pdfVIP

维普资讯 718 JournalofChinesePhysician，May，2004，Vol6，No5 亚细胞蛋白质组学研究 李茂玉(综述)，陈主初(审校) (中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋 白质组学重点实验室，湖南 长沙 410008) 关【键词] 亚细胞 ；成份制备 ；蛋 白质组 在蛋白质组学研究中首先要应用各种分离技术如双向电 用 Borderies等F4j在研究模式生物拟芥南细胞壁蛋 白质 丁、采用 泳等将蛋 白分离纯化．然后结合质谱技术、生物信息学方法对 分步抽提法 ．应用不同盐浓度、螯合剂抽提其细胞壁蛋 白质 ．在 蛋 白质进行鉴定。但细胞 内的蛋 白质种类繁多 ．性质多样 ．丰 鉴定的5O个细胞壁蛋白质中．有 13个是新蛋 白。而且在鉴定 度差异大．常规蛋白质组学方法不能做到分离和检测细胞中的 的细胞壁蛋白中76％是碱性蛋 白。Lehner等 1探讨 了适合2DE 全部蛋白质 J。亚细胞蛋白质组学研究的着眼点在蛋 白质组 分离的膜蛋 白抽提方法 ．他们以A549细胞为对象评价 了三种 的特定成分．而非整个蛋白质组 ．能够有效弥补 目前蛋 白质组 抽提方法 ：蛋 白溶解度分步抽提法 、去污剂法 、密度离心法。作 研究方法学上的不足。 者认为采用简单的分步抽提法 能够有效地从少量样本 中抽提 】 亚细胞蛋白质组 的概念 膜蛋白．且能经优化2DE条件有效分离和鉴定 。目前分步抽提 亚细胞蛋 白质组是亚细胞结构如亚细胞区室 、特定蛋 白质 法在有细胞壁结构的生物体如细菌等的蛋 白质组研究中应用 组分、细胞器等所包含的所有蛋 白质。亚细胞结构在细胞的生 较多。另外针对蛋白质某些共 同特性或通过修饰使其带有某 命活动中都与特定的细胞功能相联系。分离、鉴定其在不同生 些特性 ．应用物理化学方法分离亚蛋 白质组分 ．结合质谱技术 理状态下的蛋 白质表达情况对于全面 了解细胞的功能具有 重 进行蛋白质鉴定也是亚细胞蛋 白质组组分分析的一种路线。 要意义。一方面可以为我们提供更多生命活动的本质、细胞功 亚细胞蛋 白质组分分离的方法有：免疫共沉淀法 、亲和标记法 、 能紊乱的分子机制等信息。另一方面多种疾病相关 的基 因表 反向高效液相法及这些方法 的相互结合。这些方法在亚细胞 达产物与某些特定的细胞器相关联 ．直接分析这些细胞器的蛋 特定蛋白组分分析中应用较多。由于不 同的生物体细胞性质 白质表达变化，能够更容易、更快速地寻找到有诊断、治疗价值 各异．同一方法在不同细胞中使用效果也不 同，因此没有一种 的信息。 针对特定亚细胞结构 的通用分离方法 。同时对于 目前采用 的 2 亚细胞蛋白组分的制备 亚细胞组分 的分离方法的分离效果还要通过其他方法进行检 亚细胞结构的分离浓集是亚细胞蛋 白质组研究 的重要环 验 一般是通过检测其标志物如特征性酶的浓度来实现。 节。差速离心结合密度梯度离心法分离纯化亚细胞结构在细