腺相关病毒载体和其在基因治疗中的应用.pdfVIP

维普资讯 中国康复理论与实践 2006年1月第 12卷第 1期ChinJRehahilTheoryPractice，January2006，Vol12，No．1 ·51 · · 综述 · 腺相关病毒载体及其在基因治疗 中的应用 李展 综述 ，安云庆。审校 [关键词]腺相关病毒 ；基因治疗 ；综述 中圈分类号 ：R394．8 文献标识码 ：A 文章编号 ：1006—9771(2006)Ol0051—02 [本文着录格式] 李晨 ，安云庆。腺相关病毒载体及其在基 因治疗 中的应用EJ]中国康复理论与实践，2006，12(1)：51—52 1腺相关病毒的生物学特性 式的病毒颗粒感染性较低 。 目前认为 VP1对病毒颗粒 的稳定 腺相关病毒 (adeno—associatedvirus，AAV)属微小病毒科 ， 性或感染性具有重要作用 ；VP2在病毒样空颗粒 的装配 中起重 病毒颗粒直径约 2o～26am，20面体 ，无包膜 ，其病毒基 因组 要作用 ；VP3与 VP1或 VP2共 同完成核定位 。 DNA为单链 ，线形 。AAV属于依赖性病毒 ，最初被疑为腺病 3 基 因治疗 中影响AAV载体转染效率的因素 毒培养过程中的污染成分，后来发现它常定居于人类呼吸道和 目的基因的转染效率是评价基 因治疗载体的重要指标 ，也 胃肠道 ，且能够在哺乳动物细胞中长期潜伏存在 。 是改进载体的主要方向。影响AAV载体转染效率 的因素有以 2 AAV载体的结构和功能 下几个方 面： AAV基 因组 DNA长 4680bp，两端各有一结构完全相同 3．1 易感细胞表面病毒受体类型及其丰度 各种血清型 AAV 的反 向末端重复序列(invertedterminalrepeats，ITRs)，长 145 载体主要区别是衣壳蛋白不同，因此对不 同的组织和细胞 的转 bp，其 中外侧 125个寡核苷酸配对折叠成 T一型发夹样 的回文结 染效率存在差异。如 AAV2进入细胞的过程是 由基础受体(硫 构 ITRs包含 AAV病毒复制、整合、拯救和包装所必需的全 酸肝素蛋 白多糖受体)和辅助受体 [包括 1型成纤维细胞生长 部顺式作用元件_1] 最近研究表 明，ITRs还具有 比较弱的促进 因子受体 (FGFR一1)[33和整合素 nV口5[]介导产生 AAV5主 mRNA转录的活性[2] 两端的 ITRs之间为两个开放式阅读框 要通过与细胞表面 N端富含硅酸的受体结合进入细胞 ；AAV一4 架 ，含 Rep基因与 Cap基 因，分别编码与 AAV复制相关的 则通过与细胞表面 O端富含硅酸 的受体结合进入细胞 其他 Rep蛋白和包装成完整病毒所需的衣壳蛋 白(Cap蛋 白)¨1]。 血清型AAV受体的研究报道 目前 尚未见到。AAV2载体对多 Rep基因含有 p5和 pl9两个启动子 。其 中p5启动基因编 种组织细胞 (如表面具有硫酸肝素蛋 白多糖受体 的肌 肉、视 网 码产生 Rep78和 Rep68蛋 白；pl9启动基因编码产生 Rep52和 膜、肝脏 、神经元细胞等)具有较好 的转导效率 ；呼吸道纤毛上 Rep40蛋 白。Rep52和 Rep40蛋 白羧基末端氨基酸序列分别与 皮细胞相对缺少硫酸肝素蛋 白多糖受体 ，故 AAV2载体在肺组 Rep78和 Rep68蛋 白相 同。上述 4种非结构 Rep蛋 白是一种 织 中转导效率相对较低 。研究发现 ，在小 鼠肝脏和肌 肉中感染 位点特异性的DNA结合蛋 白，具有切 口酶和鹪螺旋酶的活性， 效率 由高到低 的顺序为 ；AAV15324L 。 日前正致力 可调控 自身mRNA的转录 ，在病毒 DN