霍乱毒素B亚单位地研究进展.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 决定簇、单链抗体片段或细菌表面酶的细菌。已经有实验证明N一末端可延伸而且S蛋白内部一些位 置可插入外源抗原而不会破坏S蛋白形成类结晶结构的能力。 综上所述，从目前的实验证据可以确信，与普通食物的经口免疫耐受作用不同，乳酸菌具有免 疫活性，这种活性不仅限于增强黏膜免疫功能，对系统免疫功能也有调节作用。而且这种作用机理 和条件有待进一步研究。这些研究进展，对于进一步认识和利用传统的乳酸菌发酵食品，开发新的 功能更强的乳酸菌发酵食品，具有重要的指导意义。 ◆考文■(‘) 霍乱毒素B亚单位的研究进展 胡博李昌鲁会军叶明金宁一 (军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062) 近年来，随着分子生物学和免疫学的迅速发展，使传统的疫苗生产方式发生了根本的变化，疫 苗研究领域变得异常活跃。人们通过DNA重组及多肽合成技术获得高纯度和针对性更强的抗原决定 簇和抗原，从而诱导特异性的免疫保护，生产高精确度的亚单位疫苗。但是，问题随之而来，这些 抗原决定簇免疫原性相对较弱，因此必须增强其免疫原性，这就需要发展新型载体和佐剂。一方面 是活性载体系统，如痘苗病毒、沙门氏杆菌、乳酸杆菌等来表达保护性抗原和抗原决定簇；另一方 面是非活性载体，即通过将特异性抗原或抗原决定簇与之混合、偶联、包埋或融合等方式相结合， 起到免疫佐剂的作用，如免疫刺激复合物(ISCOM)、脂质体及微生物蛋白(如大肠杆菌不耐热肠毒 素、霍乱毒素、乙型肝炎病毒核心抗原等)等。其中以霍乱毒素(CT)及其B亚单位(CTB)因其 独特的生理功能，近年来备受各国学者重视，已成为国内外研究的热点。 1 CT的结构特性 CT是霍乱弧菌分泌的一种不耐热肠毒素，由一个分子量为27kDa的毒性A亚基(CTA)和五 个完全相同分子量为11．7 条由240个氨基酸组成的单链，含有18个氨基酸组成的信号肽。在其成熟过程中在194、195位氨 基酸残基间被蛋白水解酶裂解开，成为两个片段，即CTAl与CTA2，二者以二硫键连接。CTAl具 氨酸残基ADP一核糖基化，与CT的毒性有密切关系，同时与cT的佐剂作用有密切相关：cTA2主 要功能是连接CTAl和CIB，由53个氨基酸组成。 CTB由103个氨基酸组成，5个亚单位间以非共价结合形成紧凑稳定的圆桶状五聚体环，其五 聚体的亚基之间的结合力很强，是目前已知最为稳定的非共价键结合蛋白复合体之一，因此在分离 能刺激机体产生抗毒素抗体，是CT的免疫原部分。其最基本的受体是神经节苷酯GMl，即Gal(B1．3) 乳动物细胞表面上的一种独特糖鞘脂，通过神经酰胺尾部插入胞质膜的外层，而将其五糖部分暴露 酶活性，它能激活G蛋白，进而使腺苷酸环化酶被激活，致使细胞内cAMP浓度升高，导致腹泻。 其他抗原提呈细胞的提呈作用； (3)增强抑制性T细胞分泌TGF．B。 2 CTB黏膜免疫佐剂研究现状 佐剂是能增强抗原的免疫原性的试剂，其作用方式主要有两种：(1)延长抗原在体内的存在时间； 253 综述部分 (2)增强机体免疫系统对外来抗原的应答。CT作为一种粘膜免疫佐剂，直接作用于免疫系统，提高 整体的免疫反应强度，从而增强对于某一抗原免疫反应。由于CT分子中起导向作用的cTB亚单位 的受体GMl存在于体内几乎所有的细胞类型中，因此它可以作用于T细胞，B细胞或抗原提呈细胞， 通过多种可能的机制，直接激活免疫系统。CT虽然具有良好的黏膜佐剂作用，但由于CT具有较大 的毒性，限制了其在动物以及人体中的进一步应用。因此，很多研究致力于CT不具有毒性的B亚 单位，并取得了一定的成果。 2．1 cTB的免疫佐剂研究 2．1．1 CTB的免疫佐剂活性研究 早期对于cTB的免疫佐剂作用的研究，主要是用从cT全毒素中纯化出的天然cTB进行。其结 果表明天然CTB是很好的佐剂，可与多种抗原经多途径产生黏膜免疫应答。Takada等将纯化的CTB 与伪狂犬病毒糖蛋白(GlycoproteinB，gB)相混合，一同经鼻腔免疫小鼠，观察CTB的佐剂作用。 结果表明：CTB可以增强gB的免疫原性，具有明显的佐剂活性。wu等以免疫原性很弱的链球菌 表面蛋白抗原(AgI／II)为抗原，研