四川地区HBV基因型及耐药分布流行病学的研究.pdfVIP

第五届中国病毒性肝炎与艾滋病实验室诊断与临床高峰论坛 四川地区HBV 基因型及耐药分布的流行病学研 究 应斌武 陆小军 陈捷 李壹 周娟 陶传敏 王兰兰 作者单位：610041 成都，四川大学华西医院实验医学科 通信作者：王兰兰，电子信箱：wangll87@126.com 乙型肝炎病毒 （hepatitis B virus ，HBV ） 上清。后加入 20 μl DNA 提取液，振荡数秒充分 是全球最具威胁的病原体之一。全球约有 20 亿 溶解沉淀，4000 r/min 离心 30 s，100 ℃保温 10 人感染乙肝病毒，其中有超过 3.5 亿人发展为慢 min ，12 000 r/min 离心 5 min，取上清液-20℃ 性感染者，而每年约有 60 万人死于慢性或急性 冷冻备用。 乙型肝炎 [1] 。我国约有 8%～10%成年人为慢性 三、HBV 基因型和耐药突变检测 HBV 感染者，其中慢性乙肝患者人数高达 3000 在 Light Cycler 480 系统上进行 PCR 扩增， 万 [1] 。HBV 属于嗜肝 DNA 病毒科，其基因组 循环参数如下：42 ℃逆转录 5 min；94 ℃，变性 为部分闭合双链环状 DNA ，全长约 3.2 kb 。根 5 min；40 个 PCR 循环：94 ℃变性 7 s 和 60 ℃ 据 HBV 全基因组序列大于 8%的差异，HBV 可 退火 50 s；最后72 ℃延伸 5 min 。利用ABI 3130 以分为 A～H 八个亚型。HBV 基因型不仅有地 （美国应用生物系统公司）对所得PCR 产物进 域分布差异，而且与疾病的发展有关，不同基因 行 DNA 测序。将序列结果与美国国家生物技术 型的 HBV 病毒对于抗病毒治疗也有着不同的 信息中心（NCBI ）的HBV 数据库进行比对，得 应答效果 [2] 。本研究我们采用DNA 测序法检测 到 HBV 基因型和分子耐药信息。 HBV 基因型，分析四川地区 HBV 基因型的分布 四、统计学分析 及耐药情况，并结合中国其他地区的 HBV 分型 对分类资料采用卡方检验，连续定量资料采 数据以探讨 HBV 基因型在我国的流行现状。 用t 检验。正态分布的数据用均值±标准差表示， 对非正态分布的数据用中位数表示。所有的统计 对象与方法 分析均采用 SPSS 17.0 软件完成。P ＜0.05 为有 一、对象 统计学意义。 本研究纳入了 2009 年 8 月到2012 年 1 月到 四川大学华西医院肝炎门诊就诊的 720 名 HBV 结 果 感染患者。纳入条件为：HBsAg 阳性，HBV 病 1．四川地区HBV 感染者 HBV 基因型的分 毒载量≥3 log copies/ml，未同时感染乙肝病毒 布：本研究纳入的 720 例四川 HBV 感染者血 以外的其他病毒如 HIV 、HCV 、HDV 。诊断符 清都成功分型，共发现 3 种 HBV 基因型，分 合 2000 年“病毒性肝炎防治方案”的标准。 别为 B 、C 、D 型，其中以 B （465 ，64.6% ） 二、乙肝病毒 DNA 提取 和 C （253 ，35.1% ）型为主，此外还发现 2 例 每一份血清吸取 100 μl，分别加入 100 μl D 型（2 ，0.31% ）HBV 病毒株，其中有 1 例 DNA