野油菜黄单胞菌中长链3-酮脂酰ACP合成酶de鉴定.pdfVIP

华南农业大学学报 2015，36(2)：49—54 http ffxuebao．scau．eduan JournalofSouthChinaAgricultural University doi：10．7671／j．issn．1001—411X．2015．02．009 董会娟，余永红，王海洪，等．野油菜黄单胞菌中长链3-酮脂酰ACP合成酶的鉴定[J]．华南农业大学学报，2015，36(2)：49．54 野油菜黄单胞菌中长链 3一酮脂酰 ACP合成酶的鉴定 董会娟 ，余永红 ，王海洪 ，马金成。 (1华南农业大学 生命科学学院／广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室，广东广州510642； ’ 2广东食品药品职业学院，广东广州510520) 摘要：【目的】研究野油菜黄单胞菌Xanthomonascampestris8004基因组中3个标注为3一酮脂酰ACP合成酶的基因 XcfabF1、XcfabF2和XcfabB在脂肪酸合成过程中的功能．【方法】将这3个基因分别克隆到表达载体 pBAD24M，然 后转化大肠埃希菌Escherichiacoli的 6曰和．6F温敏型突变株CY242和CY244，同时利用体外无细胞抽提物酶学 分析FabFl、FabF2和FabB蛋 白活性．【结果和结论】XcfabF1和XcfabB基因分别能遗传互补大肠埃希菌． 和 -厂n船 突变，而XcfabF2基因则不能互补大肠埃希菌 6F或 突变．体外无细胞抽提物酶学分析表明FabF1和 FabB都能完成辛脂酰一ACP的延伸，但 FabF2则不能完成该酶促反应．XcfabB基因编码 3一酮脂酰 ACP合成酶 I， 一 fabF1基因编码 3一酮脂酰ACP合成酶 II，而fabm 基因不参与中长链脂肪酸的合成． 关键词 ：野油菜黄单胞菌 ；3-酮脂酰ACP合成酶；遗传互补 中图分类号：Q93 文献标志码 ：A 文章编号 ：1001—411X(2015)02．0049—06 Characterizationoflongchain3-·ketoacyl-ACP synthasein Xanthomonascampestris DONGHuijuan，YUYonghong，WANGHaihong，MAJincheng (1CollegeofLifeSciences，SouthChinaAgriculturalUniversity／GuangdongProvincialKeyLaboratoryof ProteinFunctionandRegulationinAgriculturalOrganisms，Gtfangzhou510462，China； 2GuangdongFoodandDrugVocationalCollege，Guangzhou510520，China) Abstract：【Objective】ThefunctionsofthethreegenesXcfabF1，XcfabF2andXcfabB，whichwereanno． tatedasencodesputative3一ketoacyl—ACPsynthaseinfattyacidsynthesisinXanthomonascampestris8004 genome，werestudied． 【Method】ThreegenescolonedintoexpressionplasmidpBAD24M separately weretransformedintothefabBandfabFtemperaturesensitivemutantCY242andCY244ofEscherichia coli．TheactivityofXcFabF1，XcFabF2andXcFabBinvitrowasassayedbycell—freeextracts． 【Result andcon