凯普HPV产品操作培训.pptVIP

污染的防治 100℃加热过程中爆盖 如使用金属浴加热，可压重物以防爆盖； 水浴加热，采用螺旋盖的离心管，旋紧； 确保所用离心管的质量合格 手套污染 标本采集管未旋紧，震荡中漏液，造成手套污染；倒液时，手套污染。 应及时更换手套 加试剂或加样等操作中飞沫飞溅 小心操作，加一个样盖一个样 移液器与样本管相接触，造成样本与样本及样本与试剂间的交叉污染 移液器不能碰到样品管，选取长度合适的枪头 实验室管理 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区进行，各区物品（包括各区衣服、废液瓶）必须专用，不可以混用，每个区使用专用的仪器和设备。工作按试剂准备区、标本制备区、扩增区至产物分析区单一流向进行。 用次氯酸钠溶液（消毒水）/稀盐酸擦拭相关实验器材； 打开实验室窗户，给实验室通风； 用紫外灯照射； 如果以上方法处理两三天均无效，将实验室内耗材丢弃，换新耗材，同时做以上处理。 污染的处理 阳性点很弱，IC点也很弱，应考虑是否为有抑制物，扩增效率低，导致杂交信号很弱 与病理学结果不相符解释 客观原因 操作原因 ① HPV感染先于细胞学感染，HPV消退先于细胞学消退 ②HPV感染型别不在21种型别检测范围内 ③ 转化区在宫颈管内，取不到转化区细胞 ④病毒基因组整合入人细胞染色体并丢失L1片段而得到假阴性结果 ⑤ 样本本身DNA浓度低，低于HPV分型检测下限 ① 样本本身DNA浓度低，低于HPV分型检测下限 ② 反复冻融、运输过程中DNA降解 ③ DNA提取过程中，由于操作不慎造成DNA丢失（如去上清时，将DNA倒掉或者吸走、DNA溶解不够充分等） 取样造成：TCT取样后取样，没取到有效细胞或用药造成假阴性 病理科结果判读失误 创新专业追求卓越 凯普技术支持中心 2013.04 凯普HPV产品操作培训 技术原理： 基因扩增 导流杂交 低密度基因芯片 分型： 15种高危型别： HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68. 6种低危型别： HPV 6,11,42,43,44,CP8304（81）. 21 分型 宫颈脱落细胞 用棉试子擦去宫颈口的分泌物，取宫颈环状上皮与柱状上皮转化处宫颈脱落细胞 男性尿道标本 用细小棉拭子伸入尿道约2-4厘米，捻动拭子采集上皮细胞，将棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检（采集标本前2小时禁小便）。 男女性疣体标本 既可以直接切下疣体组织放进无菌玻璃管内，又可以用一次性注射器把疣体刺破后再用棉拭子反复擦拭病灶处脱落细胞置入无菌玻璃管，密闭送检。 适用样本及采集方法 ① 细胞学检测采集的样本中，凯普可以使用TCT检测所剩余的保存液来检测，但需要根据所剩细胞的浓度适当增加取样量至1~2ml。 ② 如果必须使用同类产品保存液保存的样本，亚能与港龙的保存系统我司可以提取使用，HC-II的保存系统要确保未进行处理过才可使用。 样本采集前注意事项 A 不可在碘试验和醋酸试验之后采集样本。 （可能会抑制PCR反应） B 检查前48小时内不要作阴道冲洗，不要用避孕药膏 等 等阴道内用药物。 （（可能会抑制PCR反应） C 检查前48小时不应有性生活。 D 月经期不可采集标本。（防止血液过多） E 注意避免交叉污染。 先采集HPV检测样本，再采集TCT或LCT、病理组织样本 样本采集后，如若不能马上检测，应将样本置于冰箱4℃存放，并在一周时间内检测。应避免反复冻融。 一周后检测的标本应保存在-20 ℃。 样本采集前注意事项 取800μl临床样本，加入离心管中 14000rpm离心3分钟，去上清 加入400μl溶液Ⅰ，混匀 100℃裂解15分钟 加入400μl溶液Ⅱ，混匀，放置5分钟 14000rpm离心5分钟，去上清 14000rpm离心1分钟，再次去上清 加入60μl溶液Ⅲ充分溶解，-20℃保存 对于无明显肉眼可见组织刷取物时，可适当加大实验样本量，或多次收集样本。取样前振荡混匀。 溶液Ⅰ用于裂解细胞，释放DNA。 金属浴应防止爆盖发生，可压重物，15分钟后，待金属浴温度降至80℃以下再取出离心管；水浴应用螺旋盖离心管，旋紧，同时应防止进水。 裂解后应点动离心再加入溶液Ⅱ 溶液Ⅱ用于溶解脂类、蛋白质等杂质，沉淀DNA。溶液Ⅱ放入冰箱预冷可提高DNA的沉降效率 该步意在充分去除溶液Ⅱ，因溶液Ⅱ为有机溶剂，会影响Taq酶的活性，抑制PCR扩增，导致IC点浅或者不出的情况。 溶液Ⅲ用于溶解DNA。点样上机前，应进行离心，14000rpm，1分钟。以沉淀细胞碎片