特异类黄酮促进根瘤菌侵染不同油菜根系研究.pdfVIP

增刊总第28期 华中农业大学学报 Sun．Sum28 of ‰1999 1999年9月 JoundI{uazh0【lgA西cultIldU蚵Ⅳe鹅时 特异类黄酮促进根瘤茵侵染 、，{，． 不同油菜根系的研究+ 胡小加 黄沁洁 张学江 (中国农业科学院油料作物研究所，武汉430062) 摘要本文报道田菅圊氛根瘤菌A∞r艋曲叫¨f龇胁∞如珊lRBc314【p^Ⅱ啦7)侵染不同油菜品系的 研究结果。所用菌株以碎ts为报告基因，侵染郭位为删根缝隙。所用油菜为4类品系，高硫甙葡萄 糖甙(硫甙)、高芥酸；高硫甙、低芥酸；低硫甙、高芥酸和低琉甙、低芥酸。每类品系各为2个品种” 类黄酮能有效地促进高硫甙品系的侵染率。通过切片和显微镜观察，细菌存在于根内外皮细胞间 隙并能在细胞问隙移动．并通过己炔还巨法测定到低的斟氯酶活性。从油菜根系分离出的细菌倒 接列原寄主(田菁)j．能形成有效根瘤。 关键词类黄酮：根瘤菌；油菜 4 38+；s154 中图法分类号S154 早在ioo多年前，科学们已发现并证实r豆科植物和根瘤菌共生并能有效地固定空气中 的氮气。目前最有效的生物尉氮系统魁根瘤菌一豆科和弗兰克氏放线荫一林木植物共生体系， 细菌在植物体内特别组织中固氮，此组纵设称为根瘸。大部分被固定的氮为植物所吸收…。 但象玉米。闵氮螺菌的联合固氮体系中，固氮螺菌侵染的主要部位为玉米根的表面，在其表面 与其它根际微生物的竞争qt，固氮螺菌所固定的氮仅有少量为玉米所利用“1。现有的研究结 果证明根瘤菌能侵染玉米、小麦和水稻的根系，但侵染率较低…。田菁圈氮根瘤IRcB314能在 田菁的茎和根卜结瘤。瘤子是由根瘤菌通过细胞裂缝侵染而形成的，但不形成侵染线，在根瘤 内细菌转变成类菌体并固氮“1。同时，IRGB314具有其它根瘤菌不能与其相比的是，在氧浓度 相对高的条件下(12fⅢol，L可溶解氧)能够固定氮”j=本研究以掣s为报告基因，采用j亲本 能明确地发现所接种的根瘤荫。通过检测存在于根瘤菌中的gl】s基因得到根瘤菌的侵染频 率，以及类黄酮所起的作用等，为研究根瘤菌一非豆科作物的相互关系和细菌肥料在油菜上的 应用打下坚实的基础。 l材料与方法 1．1试验材料 命科学系提供。 2)油菜品种。试验所用油菜品种均为片蓝型油菜(坫表1)。 3)类黄酮。黄烷酮(Nain常n叫，蚴自美固酉范玛化学公司。 *国家、潮北省自然科学摹盘私中国农科院院长基金资助项l{ 总第28期 胡小加等：特异类黄酮促进根瘤菌侵染不同油菜根系的研究 151 1．2试验方法 1)油菜种子的处理、培养、加黄烷酮及接种根瘤菌。种子用0．1％Hgck进行常规表面灭 菌，在26℃下催芽，待种子萌发后将其转人到25rrm×150 mm大小的试验管中，试管中含有 l×1舻个细胞)接种量为200 pl。每个处理14个重复，将含有幼苗的试管置于24℃光照室培 养，光照强度为3200L(。 表1试验所用油菜品种及来源 2)gus基因的检测及显微镜观察。将油菜接根部剪下，放入用二甲基甲酰胺溶液所配制的 含2％r出u(5一溴一4’氯一3一吲哚一口一半乳糖自)溶液中，过夜观察。通过组织化学染色，及艄基因 所产生的p半乳糖}i=与x—u起兰色反应“+即被根瘤菌侵染的根部为兰色。将根部兰色部分 切F，采用Fpun812环氧树脂包埋、切JL、甲基胺兰_染色及光学显微镜舰察”J。 3)同氮酶活性测定。当油菜生长至28d时，取生长在试管中的油菜根系，用乙炔还原法 测定其固氮酶活性…。 4)根部内含菌的分