鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素高水平耐药分子机制研究.pdfVIP

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素高水平 耐药分子机制研究 聂璐袁敏游雪甫 (北京协和医学院医药生物技术研究所，北京，100050) 摘要：目的研究编码氨基糖苷类修饰酶(Aminoglycosidesmodifying 码16S rRNA甲基化酶的3个基因在高水平耐氨基糖苷类抗生素的鲍曼不动杆菌中的分布。 方法微稀释法(Microdilution 不动杆菌对庆大霉素、阿米卡星的敏感性，筛选出高水平耐氨基糖苷类抗生素的菌株。用PCR检测高水平 耐氨基糖苷类抗生素菌株中的氨基糖苷类修饰酶基因及16SrRNA甲基化酶基因。 结果 16S rRNA甲基化酶基因中口，7砝基因的检出率达94．2％(114／121)，其余2个16SrRNA甲基化基因均未检出。 结论临床分离的鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素高水平耐药情况不容乐观，16SrRNA甲基化酶 基因介导的氨基糖苷类抗生素耐药性问题应引起临床足够重视。其中anna和氨基糖苷类乙酰转移酶基因 阳性率较高，且多个基因共同检出率也较高。氨基糖苷类抗生素高水平耐药可能由a／7／L4、乙酰转移酶基 因介导产生，多个基因很可能定位于一个基因盒，共同在不同的菌株之间进行传播。 关键词鲍曼不动杆菌，氨基糖苷类抗生素，修饰酶，16SrRNA甲基化酶，耐药 氨基氨基糖苷类抗生素因其广谱、高效的特点，广泛应用于临床。其临床主要适应症为革兰氏阴性菌 所致的严重感染L2。其通过作用于细菌核糖体，降低蛋白翻译过程保真性，抑制细菌蛋白质合成，并破坏 细胞完整性而引起细菌死亡3。在进入临床广泛使用的60多年中，细菌通过不断的进化，产生了强大的耐 药机制抵御抗生素的选择。细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药机制主要归结为四种：(1)产生氨基糖苷类修 rRNA 甲基化酶。(3)细菌细胞外膜通透性改变。(4)外排泵对药物的外排作用。其中以产氨基糖苷类修饰酶和 16S rRNA甲基化酶是细菌最主要的耐药机制。前者修饰氨基糖苷类抗生素侧链上的氨基和羟基，后者使 氨基糖苷类抗生素的作用靶点16SrRNA的A位点中一个或几个碱基甲基化。两种机制都可以有效的阻断 氨基糖苷类抗生素与靶点结合，从而使其失去抗菌活性锵。 鲍曼不动杆菌是不动杆菌属中最常见的非发酵革兰阴性菌，是一种重要的条件致病菌，可引起包括呼 吸机相关性肺炎、皮肤和软组织感染、伤12感染、继发性脑膜炎、血行感染等各种感染等9。据美国院内 感染检测数据及中国国家耐药菌监测网资料显示，鲍曼不动杆菌在革兰氏阴性非发酵菌引起的院内感染中 占第四位，鲍曼不动杆菌对各种药物都能显示出耐药性并且耐药基因在菌株中能快速广泛的转移和传播， 受到各界广泛关注10-130本研究通过氨基糖苷类抗生索耐药表型鉴定及对常见的13个氨基糖苷类修饰酶 126 (AMEs)基因、3个16SrRNA甲基化酶基因的检测，阐述介导临床分离的鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗 生素高水平耐药的分子机理。 1．试验材料与方法 菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603为质控菌。 所标准品，药物配制时按实际活性药物计算。 果判读根据CLSl2010年标准。 1．4耐药基因型鉴定 物。 表1靶基因引物序列、目的片段长度及退火温度 127 G r：CCACAGCTTCCGA：I’AGCAAGA f．GTG GTTTTTACAGGAATGCCATC 641bp aph(2)．1毋。 ‘