肝病关联基因IL-10%2fESR1基因多态性与HBV相关急性肝衰竭的关联分析和功能研究.pdfVIP

下，具有高度的免疫原性的HBcAg可迅速启动细胞免疫反应，而使受乙肝病毒感染的肝细胞在机体不 断活跃的免疫攻击下破坏消耗，结果可能伴随血清HBeAg转阴以及病毒载量逐渐的降低。 平明显不同。HBcAg免疫组化检测结果依次表现为核型及混合型、浆型分布和阴性的患者，其HBeAg DNA特点的结果验证了HBcAg肝细胞内的分布与机体的免疫清除状态有关的观点。 免疫清除过程相关。本文HBcAg核型及混合型分布的患者，可能处于较高的免疫耐受状态，大部分病 量亦渐渐消耗至低水平。 因此，我们可以得出以下的推测，HBcAg不同的表达形式导致的肝组织炎症的差异性是血清 cAg检测阴性的患者其HBeAg阳性率及HBV-DNA载量最低。 20． 肝病关联基因IL一10／ESRl基因多态性与 HBV相关急性肝衰竭的关联分析和功能研究 1．第三军医大学西南医院全军感染病研究所(重庆400038) 215157) 2．中国人民解放军94906部队62分队(苏州 晏泽辉1’2 邓国宏1 王宇明1 【摘要】 性关联位点T29C连锁的3个SNPs(IVSl IVSI A-592C和T-819C位点完全连锁．ESRIT29C和ESRI IVSIT-01C位点具 HBv．ALF的易感性．功能实验证实IL-IOA-592C位点具有等位特异性的启动子的调节活性．ESRI IVSl 有等位特异性的增强子的调控功能．结论tIL-lOA-592C和ESRl (rSNP)．IL．10·592C和ESRl lVSl-401C等位显著的增加了HBv-ALF的患病风险． 【关t词】 receptor HBV感染及其相关肝病的遗传关联研究也日益受到众多研究者的重视，先后在不同人种的群体水平证 ·——154—一 衰竭(HBV—ALF)的关联研究，也缺乏阳性关联位点的功能验证。本部分拟在我们收集的中国汉族病 基因与阳性关联位点T29C连锁的3个SNPs(IVSl rSNP在HBV感染患者疾病重症化进程中的功能和作用。 材料和方法 一、材料 469例，HBV相关ALF患者359例。HBV无症状携带者纳入标准为HBV 无明显异常lHBV相关急性肝衰竭患者的诊断参照AASLD2005年的指南《急性肝衰竭的处理意见》 以及中华医学会感染病学分会和中华医学会肝病学分会《肝衰竭诊疗指南》，HBV 性脑病，本次发病前既往无慢性肝病和肝硬化，所有病例排除混合HCV、HIV等病毒感染以及脓毒症 等感染的的可能。 周血单个核细胞：自我院输血科成分输血滤盘分离并培养。新生儿脐带血取自我院妇产科，常规分离并 Neo-SiRNA空白质粒购自上海吉凯公司生物技术有限公司。 (三)试剂、和仪器器材 (略)。 二、方法 (一)SNP分型：病例对照样本的DNA分型综合采用PCR—RFLP和直接测序法进行。 (二)凝胶移动抑制分析(EMSA)实验：合成IL-10-592A／C和ESRlIVSl-401T／C位点等位特 异性寡核苷酸探针，单链探针的退火体系和条件、核蛋白提取和EMSA具体操作参照文献方法进行。 (二)荧光素酶报告基因实验：设计并构建不通长度的系列等位特异性载体，克隆，克隆人pGL—Pro- moter空白质粒，转让细胞，检测荧光活性。 (三)等位特异性染色质免疫沉淀(HaploChIP)：分离IL-10—592A／C和ESRlIVSl—401T／C位点 质免疫沉淀，然后提取纯化免疫沉淀DNA，采用等位特异性的MGB探针进行双色荧光定量PCR检 测。 (四)特为特异性RNA干扰：构建等位特异性RNA干扰载体，转染不同基因型的细胞，定量 PCR和WesternBlot分贝检测mRNA水平和蛋白水平等位特异性干扰效果。 (五)统计分析l 例与对照组的等位频率和基因型分布差异用x2检验分析。SNP位点在HBV感染中