表面等离子共振(SPR)在生物表面化学和分子间作用研究.pdfVIP

第21卷第3期 Vo1．21一NO．3 百色学院学报 JOURNAL OF BAISE UNIVERSITY 2008年6月 Jun．2008 生物表面化学及分子间相互作用研究 表面等离子体激元共振 (SPR)在生物表面化学中的应用 琚黎华 (广西机电工程学校，广西南宁 530001) 摘 要： SPR检测是一种光学技术，在生物表面化学及研究生物分子相互作用方面得到广泛应用。文章主要 综述SPR对分子相互作用的研究现状，阐述与评价SPR在生物化学中的应用，并对其应用前景进行分析。 关键词： 表面等离子体激元共振；生物分子相互作用；生物传感器；生物化学 分类号： Q632 文献标识码： A 文章编号：1673—8233(2008)03-0074-05 生物分子之间的相互作用是生命现象发生的基础，一切生命过程都是生物分子之间或生物分子和其它 物质分子之间进行接触，相互作用，发生物理和化学变化所引起的[1]。因此，研究生物分子之间的相 互作用可以阐明生物反应的机理，揭示生命现象的本质。生物表面化学就是利用一些表面分析仪器或 方法，从检测生物分子表面物理、化学特性出发，进而研究生物分子之间相互作用的一个新的研究领域。 目前，用来研究生物表面化学的仪器方法有很多，但其中能够实时原位动态地检测生物分子之问相 互作用的方法为数很少。表面等离子共振技术 (Surface Plasmon Resonance，SPR)由瑞典科学家lied— berg于1983年首次用于IgG抗体与其抗原相互作用的测定口]，随后，该技术被引入生物传感器领域并 迅速渗透到基础生命科学研究中。SPR的优点在于能够实时检测生物分子结合反应的全过程，不需要 对分子进行标记等。其发展非常迅速，已经成为一种成熟的检测生物分子间相互作用的方法。 1 表面等离子体激源共振的原理及特点 表面等离子体激源共振 (SPR)是一种物理光学现象，表面等离子体(SP)是沿着金属和电介质之间界面传播的 电磁波形成的。当平行表面的偏振光以称之为表面等离子体共振角入射在界面上，发生衰减全反射时， 入射光被耦合入表面等离子体内，光能大量被吸收在这个角度上，由于表面等离子体共振而引起界面 反射光显著减少。SPR对金属表面电介质的折射率非常敏感，不同电介质其表面等离子体共振角不同， 同种电介质，其附在金属表面的量不同，则SPR的响应强度不同。基于这种原理的生物传感器通常将一种 具特异识别属性的分子即配体，固定于金属膜表面，监控溶液中的被分析物与该配体的结合过程。在复 合物形成或解离过程中，金属膜表面溶液的折射率发生变化，随即被SPR生物传感器检测出来 。 与传统的相互作用技术相比，SPR生物传感器具有如下显著特点： (1)实时检测，能动态地监测生物分子相互作用的全过程； (2)无需标记样品，保持了分子活性； (3)样品需要量极少，一般一个表面仅需约lug蛋白配体； (4)检测过程方便快捷，灵敏度高； (5)应用范围非常广泛； (6)高通量、高质量的分析数据； (7)能跟踪监测固定的配体的稳定性； (8)大多数情况下，不需要对样品进行预处理； (9)由于SPR基于对未穿透样品的反射光的测量，所以检测能在混浊的甚至不透明的样品中进行； (10)对复合物的定量测定不干扰反应的平衡 。 2 生物表面化学及生物分子相互作用研究— —SPR在生物化学中的应用 迄今为止，SPR技术已被广泛地用来研究生物分子如蛋白质一蛋白质、药物一蛋白质、核酸一蛋白 质、核酸一核酸之间相互作用的反应动力学，结合位点和反应物浓度等信息。所涉及的研究领域包括免 疫学、酶学和蛋白组学、核酸研究、膜生物学、药物筛选等等。 2．1 免疫学领域 免疫反应是抗体与相应抗原之间的一种选择性特异结合反应。在抗体分子上，有其相应抗原的特异结合 部位，这一部位是与抗原形状相对应的分子空间。由于这种特异的结合，决定了免疫反应是一种高选择 性的反应。通过用SPR技术进行免疫分析，可以识别抗原的种类，测定抗原的浓度，获得抗原一抗体结合 的动力学常数。抗原一抗体亲和力和结合过程中的动态参数不仅可以用来研究结构与功能的关系，对 选择不同抗体用于不同用途，如在治疗、检测、诊断等方面也都具有非常实用的价值。如前所述，SPR技 术用于传感器领域所产生的第一个传感器就是免疫传感器。基于SPR原理的实时BIA技术在抗体 ／抗原结 合动力学及抗原表位 ／抗体的鉴定中有重要的应用，KarlssonI4 等以SPR技术研究HIV一1核心蛋白P 与其 单克隆体mAB的结合动力学，从杂交瘤培养上清液中获得抗核心