苯胺类供氢体-H-%2c2-O-%2c2--HRP酶催化反应研究.pdfVIP

第十届伞国有机分析学术研讨会 苯胺类供氢体一H：0：-HRP酶催化反应的研究 焦奎张书圣 (青岛化工学院应化系．青岛266042) 关键词苯胺类供氢体酶催化反应机理 摘要苯胺类供氢体作底物的伏安酶联免疫分析具有很高的灵敏度，应用电分析化学，HPLC， UV，FTIR，N崃及蚂等技术对苯胺类供氢体作底物的酶催化反应进行了详细的研究。本文对这 一领域的工作作一综述。 辣根过氧化物酶(HRP)能够催化Hz02氧化苯胺类供氢体，通过各种手段检测酶催化反应产 物进而可以确定HRP的量。而HRP在免疫分析中是一种很好的标记物，将HRP标记到抗原、 抗体上后就可以建立各种抗原、抗体、药物、微生物以及各种病毒的免疫分析方法。根据检 测手段不同，可以建立各种免疫分析方法，如：化学发光酶联免疫分析法：荧光酶联免疫分 析法；ELISA显色光度法；伏安酶联免疫分析法等。但有关苯胺类供氢体酶催化反应机理的 研究却很少有文献报道。我们提出了一系列苯胺类物质作供氢体的伏安酶联免疫分析新体 应进行了研究。本文将这些工作作一综述。 一些苯胺类供氢体酶催化反应的研究 的结果为2，2’一二氨基偶苯。我们通过HPLC和化学法分别制各了酶催化反应产物纯品， 结果证明，在选定的实验条件下， 只有一种主要产物：2，3一二氨基吩嗪。反应过程中生 3一二氨基吩嗪。 成橙红色的中间产物为OPD的醌二亚胺，由醌二_哑胺再生成最终产物2， 物的纯品，结果证明，HRP催化H202氧化PPD的产物只有一种，其结构式为： H．N 吼N≥一N NH2 邻联茼香胺(DDA)和邻甲联苯胺(0T)结构相似，两者都是联苯胺衍生物，只是取代基不 物对稀释和酸化很敏感，稀释和酸化均可使复合物解离。如果将酶催化反应溶液的酸度适当 A2I 第f‘届全国有机分析学术研讨会 的溶液中进行，则主要产物是双偶氮联苯化合物。 值有很大关系，在不同pH值下，反应溶液的颜色也相应发生变化，并且表现为不可逆变化。 不符。在选定的实验条件下，反应溶液颜色变为玫瑰红色，但无沉淀生成。结果证明，HRP 催化H202氧化DEPPDA的产物为： I 在选定的实 物的纯品。经HPLC，UV，FT—IR，NMR，MS等手段进行了研究。结果证明， 验条件下，其产物为3～氨基吩恶嗪。 本课题为国家自然科学基金和山东省自然科学基金资助项目。 参考文献 I 焦奎．张书罩．张敏。张立群．分析化学．1995．23(10)：121l 2 焦奎．张书吊．韦璃．中国科学(8辑)，1996．26(1)：57 3 焦奎．张书鼍．节璐，刘澄凡．分析学报，1997．55：1121 4 焦奎，孙刚．张书圣．中国科学(B辑)，1998．28(2)：157 in Substance- ofMechanismoftheReactionAniline-like Investigation H202一HRP System JiaoKuiZhangShusheng of InstituteofChemical Chemistry，Qingdao