三种水蛭的薄层色谱和电泳法鉴别.pdfVIP

维普资讯 中国的水蛭近百种 ，与医药有关的有十几 上样槽 中 连接稳流稳压 电泳 仪，电泳 开 始 种。 中国药典 (1990年版 )收载了三种l 时，电流控制在 20mA，样品进入分离胶后， (1)蚂 蟥 (宽 体 金 线 蛭，Whit~ iapigra 加大电流歪 30mA，整个 电泳过程保持 电流不 Whitman)；(2)水 蛭 (日本 医蛭，Hirudo 变，待指示剂行至距束端 1∞ 时，即可停止电 nipponicaWhitman) (0)柳叶蚂蟥 (尖细金 泳。经染色脱色后，得到电泳图谱，如图1。 线蛭 ，Whitmaniniaacranulata Whitman)。 其中宽体金线蛭和尖细金线蛭是非吸血水蛭， 日本 医蛭是吸血亦蛭。关于它们的理化鉴别方 法，文献上未见报道。本文研究了 日本医蛭和 田1 三种木蛏的电津田蕾 菲牛蛭 Poeeilobdellalavanica及宽体 金 线蛭 ^、 日本医蛭 B、菲牛蛙 的薄层层析 (TLC)、电泳 (SDS-PAGrt)鉴 c、宽体垒 缦蛙 (徽山湖 ) 别方法。 D，宽悻l垒缦蛙 (人工饲养) 1 实验部分 1．1 材 料 宽 体 金 线蛭 Whitmwalapigra n H工=¨二lH二二 U口A lj C 】) Whitman(野生品产于山东微山湖}饲养品由 1．4 TLC 日 HH H U口 中科院水生生物研究所杨潼实验室饲养 )、 日 n㈠㈠ 二二 层析板的制备；取硅胶H (青岛海洋化工 本医蛭 Hirudon~pponi．e．aWhitman(产于 湖 口¨ H 二[卫 厂 )4g，加 3倍体积的0．3 CMC-Na 铺成 北汉川 )和菲牛蛭 PoecilobIdellIa]ⅡavanicaⅣ (产 V 曰 于广西灵山县 )，试剂均为A．R级。 一 块 10×20cm薄 层 板，晾 干，105℃活化 1．2 供试液的制备 称取 以上三种 水 蛭的细 1h。 粉各 100mg，分别加入 1ml生理 盐水，超声 薄层条件；将一定量的样品溶液分别用微 波提取 30min，离 心 10min(3000r／mln)， 量注射器点于同一薄板上，用正丁醇一冰乙酸一 取上清液备用。 水 (3．5{2：4．5)为展 开 剂，立 l式上 行展 开 1．5 电泳分析 12cm，取出，挥去溶剂后喷洒0．2 茚三酮丙 仪器；稳流稳压 电泳仪，夹心式垂直板 电 酮溶液，在 105℃加热15rain．显出紫 红色斑 珏：槽 。 点。如图2。 试剂配制和凝胶制备：试剂和凝胶制备参 2 结果和讨论 照文献…方法进行，分离胶浓度为12％，浓缩 兰种水蛭样品的 SDS和 TLC 图 胶浓度为7．5 。 谱均不相 同 吸血水蛭和不吸血水蛭之间的差 样品处理：水蛭提取液中加 入 等 体 积的 别尤为显著。 60 甘油溶液和等体积的样品缓冲液，95℃加 在 电泳图谱 中，三种水蛭有明显的区别。 热 2min，离心备用。