尼克酰胺N甲基转移酶单克隆抗体的制备和鉴定.pdfVIP

．基础实验诊断研究． 尼克酰胺．N．甲基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定 杨肃文张钧周美霞 乐志安谢鑫友 尼克酰胺N一甲基化酶(nicotinamideN—methytransferase，4．以有限稀释法进行杂交瘤细胞株的克隆化培养：见 NNMT)是s．腺苷．L．蛋氨酸依赖的胞质酶。其主要的生物学参考文献[3]。 作用是参与生物转化，催化一些吡啶衍生物，如吡啶、喹林、 5．小鼠单抗亚型检测试剂盒测定抗体亚型：按说明书 B一咔林等的甲基化。这种酶存在人体内多种组织中，其中在 操作。 肝脏组织中表达量最大，而在其他组织，如肾脏、肺、骨骼肌、 6．蛋白印迹试验(WB)鉴定抗体特异性：将原核表达 心脏、脑组织仅有微量表达。近年研究发现，NNMT与肾癌、 帕金森病等多种疾病关系比较密切，NNMT表达水平在肾透 烷基磺酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)后，转至硝酸 明细胞癌中比在嫌色细胞型肾癌和正常肾组织中高出3倍 纤维膜上，4℃封闭过夜。将膜浸入腹腔积液中纯化后得到 多。由此推测NNMT可能成为诊断包括透明细胞型肾癌在 的单抗中，稀释比例l：6000，4℃过夜。浸洗膜3次，每次