Ln5γ2对胃癌细胞迁移、侵袭的影响和机制研究.pdfVIP

7 7 LAMC2d3一l：5GGATCCGAGAATCCTGACATTGAG3 LAMC2d3—2：5’CTCGAGCTGATCCATCTGAATCTTCAC3’ 进行原核表达后，采用肠激酶进行酶切，去除Trx及S—Tag标签，同时利用后续的His标签进行纯化。 1．2．2细胞培养 37。C培养箱中传代培养。每l周传代1 胃癌细胞SGC一7901于含10％胎牛血清的DMEM培养液5％C02 次，每隔2、3天换液1次。 1．2．3质粒转染 TM 用脂质体Lipofectamine 400ug／m1 含10％胎牛血清 。次日观察细胞长至70％～90％融合，按试剂操作说明进行转染。经G418 筛选3周后，用克隆环挑出单克隆进行扩大培养及鉴定。 1．2．4侵袭迁移实验 血清培养液培养24h使其同步化，常规消化收获细胞，将细胞重悬于0．1％BSA—DMEM无血清培养液中，细 la l Ln5Y2Domain 胞计数。在Transwell／b室下层加入6g／u Ill，小室上室加入1×105个细胞，每组设 min，水洗。 min，苏木素染色5min，水洗，伊红复染15 3个复孔。孵育24h将小室取出，甲醇固定30 用棉签擦掉未穿过膜的细胞，随机于镜下取上下左右中心5个视野，计数穿膜细胞数，取平均数。 II Transwell侵袭实验：Transwell小室滤膜上室面均匀涂1：5DMEM稀