神经干细胞体外三维培养模型的构建.pdfVIP

20l1年3月 中国科技论文在线 SCIENCEPAPERONLINE Vo1．6No3 第6卷 第3期 Mar．2Ol1 神经干细胞体外三维培养模型的构建 关 水 ，葛 丹 ，陆瑞欣 ，刘天庆 ，马学虎 ，崔 占峰 2 (1．大连K_v--大学干细胞与组织工程研 究室 ，辽宁大连 116024；2．OxfordCentreforTissueEngineeringand Bioprocessing，DepartmentofEngineeringScience，OxfordUniversity,OxfordOX13PJ，U．K．) 摘 要：研究了小鼠海马NSCs在胶原凝胶内的生长情况，构建适合于干细胞药物筛选及作用机理研究的三维培养 模型。实验采用体外培养第三代NSCs，均匀混合于胶原溶液中，形成 “细胞一胶原”的三维凝胶培养。通过扫描电 镜观察胶原的微观结构，倒置显微镜及激光共聚焦显微镜观察胶原凝胶中Nscs的生长、伸展情况；应用免疫荧光 技术鉴定NSCs，同时采用CCK-8法检测不同胶原浓度及不同培养模式下NSCs的生存和增殖能力。结果表明：质量 浓度为0．5ragm／E的胶原具有 良好的三维多孔结构，凝胶中的NSCs生长状态良好，且大部分呈Nestin、BrdU~性； 与传统二维培养方式相比，三维胶原凝胶更利于NSCs的生存及增殖。 关键词 ：神经干细胞；三维培养；胶原凝胶 中图分类号 ：Q813．11 文献标志码：A 文章编号：1673～718o(2ol1)03～0181—6 Establishm entofneuralstem cellsinvitrothree．dim ensionalmodel GuanShui，GeDan ，LuRuixin ，LiuTianqing ，MaXuehu ，CuiZhanfeng2 (1．StemCellandTissueEngineeringLaboratory，DalianUniversityofTechnology，Dalian，Liaoning116024， China；2．OxfordCentreforTissueEngineeringandBioprocessing，DepartmentofEngineeringScience，Oxford Universiyt，OxfordOX13PJ，U．) Abstract：Neuralstemcells(NSCs)，obtainedrfomthemousehippocampus，wereculturedinthethree。dimensional(3D) collagengelinordertobuildasuitable3D culturemodelofrhtestudiesofNSCsdrugscreeningandmechanism．The “cell—collagen’3D gelwasformedbymixingNSCsofthethirdgenerationintothecollagensolution．Themicrostructureof collagenwasobservedbyscanningelectronmicroscopyandhtegrowthandstretchingofNSCsincollagengelweredetected byinvertedmicroscopeandlaserscanningconfocalmicroscope．And，weappliedtheimmunofluorescencetechniquesto identifyNSCsandusedtheCCK-8methodtodetecthtesurvivalandproliferationofNSCsindifferentconcentrationsof collagenandunderdifferentculturemodes．Theresultsshowedhtathtemassconcent