蛋白酶活化受体-4在结肠癌组织中的表达及意义.pdfVIP

山东医药2011年第 51卷第 7期 · 临床研 究 · 蛋 白酶活化受体4在结肠癌组织 中的 表达及意义 陈 琳 ，王 峰 ，吴月平 ，陆仁飞 。邵建国 ，王惠民 (1南通市第三人民医院，江苏南通226006；2南通大学附属医院) 摘要：目的 探讨蛋 白酶活化受体-4(PAR-4)在结肠癌发生、发展中的作用。方法 采用Real—timeRNA法检 测28份结肠癌组织及其相应癌旁组织中PAR-4表达，并采用 2-~ Ct方法进行比较。结果 PAR-4在结肠癌组织 中表达量明显增高，平均高出癌旁组织4．o3倍 ；两者ACt比较，P0．05；低分化结肠癌组织PAR-4表达量明显高 于高分化及中分化组织 (P0．05)；高分化与中分化组织PAR-4表达无显著差异。结论 PAR-4在结肠癌组织中 尤其是低分化组织中呈高表达；PAR-4可促进结肠癌的发生及发展。 关键词：蛋 白酶活化受体_4；结肠癌；实时荧光定量聚合酶链反应 中图分类号：R735．3 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2011)07-0043-02 研究发现，多数肿瘤患者体 内都伴有不同程度 海生工公司)，LightCycler荧光定量 PCR仪 (瑞土 凝血系统激活 ，导致凝血酶大量产生 ，表现为所谓的 Roche公司)。 “高凝状态”或称为 “低级别的DIC”；而肿瘤微环境 1．2 PAR-4检测 采用实时荧光定量 PCR(Real— 中富集的凝血酶直接或间接参与介导了肿瘤细胞增 timeRCR)法。标本浸于 lmlTrizol试剂中，匀浆器 殖、侵袭、血管形成和组织的重建，提示凝血酶可能 匀浆，静置 10min，加200 l氯仿混匀，离心取上 在肿瘤生物学方面发挥重要作用 ，2J。研究发现， 清，异丙醇沉淀，75％乙醇洗涤，用紫外核酸测定仪 凝血酶的部分细胞生物学效应是通过一个新的7次 检测 RNA纯度和浓度。逆转录反应按试剂盒操作 跨膜的单链 G蛋 白偶联受体家族即蛋 白酶活化受 说明进行，将反应合成的cDNA进行分装 ，并置于一 体家族 (PAR)介导的。目前共发现PAR有4种亚 20℃保存备用。按以下反应体系进行：10×PCR 型(PAR一1～PAR-4)，对其介导凝血酶影响肿瘤细 Buffer2 txl，Mg¨ 3 ldNTPs0．4ixl，上、下游引物 ， 胞生物学效应的研究主要集 中在 PAR一1E3,4]，而对 各0．5 ，Taq酶0．3 ，SYBRGreen10．3 l，模板 PAR-4的研究相对较少。2009年 8月 ～2010年 7 2txl，用无菌去离子水补足体系至20 l。反应条件 月，我们观察了28例结肠癌患者癌组织中 PAR4 95℃、3min，95℃、5s，62oC、35s，共 40个循环。 mRNA的表达情况，现探讨其意义 。 反应在 LightCycler荧光定量 PCR仪上进行，扩增完 1 材料与方法 成后进行熔解曲线分析，得到扩增曲线、熔解曲线和 1．1 材料 选取我院 28例结肠癌患者 (男 l9例 ， 样本的循环阈值(Ct值)。靶基因 PAR-4的相对量 女9例，中位年龄 64岁)手术切除的结肠癌组织 按公式 2一AACt得出。其 中ACt=Ct(PAR-4基因) (病理证实均为腺癌 ，其 中高分化 6份，中分化 l4 一 ct(内参 18SrRNA基 因)，AACt=ACt癌组织 一 份，低分化8份)及其癌旁正常组织 (距肿瘤边缘 ACt癌旁组织。 5era)各 5O～100mg，加入 1mlTrizol，冻存于 一70 1．3 统计学方法 采用 Stata8．0统计软