枣树ZjAPX基因植物表达载体构建和功能验证.pdfVIP

园艺学报201l，38(增刊)：2496 http：／／、)IW帆alas．ac．∞ HorticulturaeSinica 26．corn Acta E-mail：yuanyixuebao@1 枣树猁瞄因植物表达载体构建与功能验证 曹秋芬+，孟玉平，郝子琪，张晓娟，郭慧娜 (山西省农业科学院生物技术研究中心，太原030031) 抗坏血酸过氧化物酶(APX)是植物为防御氧化胁迫而建立的清除活性氧体系——抗坏血酸一 谷胱甘肽(AsA．GSH)循环中的关键酶。有研究表明APX在高等植物中清除活性氧时对底物抗坏 acid，AsA)有极高的专一性，且能够在较低水平的AsA下发挥作用。为了进一步研 血酸(ascorbic 究枣树ZjAPX在植物体内的功能，构建了zjAPX的植物表达载体，并将其导入拟南芥，进行了功能 验证和分析。 I、DNA I、SmaI、肺刀dIII、BamH 光蛋白(YFP)报告基闪]由本研究室保存。限制性内切酶EcoR RT Kit、SYBR回PremixEx LigationKit、RNA酶、Taq酶、dNTPMixture、PrimeScriptTMreagent Taq“ II，琼脂糖凝胶DNA Fragment 拟南芥株系由本研究室保存。 (1)zjnPX植物表达载体的构建与转基因拟南芥的获得：根据已获得的枣树抗坏血酸过氧化物 (2)zjAPX在拟南芥体内的表达：对筛选获得的拟南芥植株进行PCR鉴定，对鉴定为转基因 植株的拟南芥种子进行NaCI胁迫，在相同胁迫条件下转ZjAPX基凶的拟南芥种子在萌发期的存活 率较野生型高，且萌发后幼苗根系也比野生型发达；生长期分别进行NaCI和干旱胁迫胁迫：转ZjAPX 基因的拟南芥植株均具有比野生型植株较强的耐盐和耐干旱胁迫的能力。采集胁迫处理过的转基因 拟南芥植株叶片，利用荧光定量分析，结果表明：转基因株系ZjAPX的基因表达量均较对照高。 (3)别剧洼枣树组织培养苗体内的表达：对辣椒枣组培苗继代和生根培养后，选取长势较好、 基本一致的生根幼苗进行NaCI和干旱(PEG)胁迫。采集胁迫后的幼苗进行荧光定量PCR分析，结 mmol·L。1 果表明，在50、100和200 NaCI胁迫下，别尸琏因的表达量呈先升高后降低的趋势，均 在6h时表达量最大，300mmol·L．1NaCI胁迫时，在3 h时表达量最大：在PEG的胁迫下，ZjA髓 MPa处理均 因的表达量均表现出先降低后升高的趋势，0．5MPa处理时，24h表达量最大，0．8和1．2 是在7h时表达量最大。说明别引湛因的表达受NaCI和干早胁迫的诱导。 关键词：枣；ZjAPX基因；植物表达载体：功能鉴定 1)S-2496-01 中图分类号：S665．1 文献标识码：A 文章编号：0513—353X(201 收藕日期：201l—08—0l 基盒项目：山西省自然科学基金项目(2010011038-2) ‘E-maih 0351-7965529 caoqiufimg@yahoo．∞皿cn：Tch