高密度发酵大量制备鸭α-干扰素基因疫苗中试生产关键技术的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次学术研讨会论文集(下册)(2008年河南新乡) 潜在危险，因此目前采用的干扰素都是基因j．【．程产品。与人医和哺乳动物相比，鱼类的分子生物学研 究相对滞后。本实验廊用RT．PCR技术从斑点义尾鲴血液淋巴细胞中克隆出了CC—IFNa基因，构建了 原核表达载体，为以后其相关的免疫学和生物学以及在鱼病泛滥时代的疾病控制研究奠定了基础。 本实验克隆的CC．IFNot基网与目前已知的硬骨鱼类的IFN基因的同源性显著高于与哺乳动物和 禽类的IFN基因的同源性。本次实验克隆的序列与斑点叉尾鲴序列同源性为96．5％，预示着中国的斑 点叉尾鲴鱼种可能与美国的原种发生了序列的变化，从而导致种质资源的变化和中国国内斑点叉尾 鲴体质抵抗力的下降。同时，斑点叉尾鲴与其他硬鱼类的同源性在50％以上，但是与高等动物诸如 禽类及哺乳动物的同源性仅有10％不到。但就仅仅在鱼类之间，其IFN基因同源性也较其他同一亚 科之间IFN低很多。鱼类之间的同源性只有50％左右，而同为禽类的鸡与鹅问同源性为70％以上。 鱼类之间和鱼与其他高等动物间低水平的同源性说明斑点叉尾鲴IFN司能较于其他的诸如哺乳动物 的IFN是不同的新类犁的IFN。同时也说明在长达450万年的物种进化中，硬骨鱼类与哺乳动物已 经产生巨大的差距。同理，鱼类之间的较低的同源性也说明可能是在漫长的进化发展中，与鱼类与 鱼类祖先相比，基因产生了巨大变化。同时也说明这些鱼类之间可能不属于同一种属。 成了5个a螺旋，与已知哺乳动物的oL型IFN更为类似。但是与哺乳动物和禽类的4个或以上糖基 仅有的一个链内二硫键也与哺乳动物和禽类的2个链内_二硫键不同，而哺乳动物B型IFN有一个链 且是其不具有信号肽的可能原因所在。同时能够说明鱼类的干扰素可能与未分化前的哺乳动物也就 是其祖先的干扰素可能更为类似。 目前我国的水产养殖领域疾病泛滥，同时斑点叉尾鲴作为引进品种这20多年来在中国近亲繁 殖，导致种质资源退化，鱼本身抵抗力极度下降。再加上水体的特殊环境，使鱼病更难得到有效的 控制。这就迫切的需要具有广普抗病毒作用和能增强细胞免疫功能的产品诸如干扰素一类来预防和 点叉尾鲴干扰素素的进一步研究奠定了基础。 参考文献(编者略) 两密度发酵大量制备鸭静干扰素基因疫苗中试生产关键技术研究 周雪1，程安春啦J，汪铭书1’2，杨梅1，段坤1 【1．四川农业大学动物医学学院禽病防治研究中心，四川雅安625014；2．动物疫病与人类健康四川省 种量、发酵时间和消泡剂添加量)优化，筛选出了适合DH5a菌株生长的最佳发酵条件为：温度37℃， 件下，pcDNA-SDIFN-a质粒含量可达到357mg／L。 关键词：高密度发酵，鸭01．干扰素基因疫苗，发酵培养条件 质粒翻uA经构建后，在确定能够标的靶基因、具有治疗潜能的基础上，对其生产过程进行研究， cell 制备质粒DNA的实验室方法很多，但大多不适于工业生产．近几年，人们对高密度发酵(high density 生物量，而且可显著提高目的质粒DNA的含量。高密度发酵对发酵设备有较高的要求，而且对发酵 通讯作者：：程安春和汪铭书。E-mail：chenganchun@vip．163．czlm 中国畜牧兽医学会动物徽生态学分会第四届第九次学术研讨会论文集(下册)(2008年河南新乡) 条件也有非常高的要求。迄今报道的高密度发酵系统，随着菌体培养密度的不断提高，发酵罐中出 现溶氧不足、刺激醋酸盐的形成等导致工程菌生长速率降低，对工程茵发酵影响很大。影响高密度 发酵的因素非常多，如细菌生长所需的营养物质、发酵过程中生长抑eJ*0eJa,,Jg、溶氧浓度、培养 温度、发酵液的pH值、补料方式及发酵液流变学特性等． 1材料与方法 1．1菌株、载体 3．1(+)质粒， 大肠杆菌E．coliDH5ct，由动物疫病与人类健康四川省重点实验室保存；pcDNA 3．1(+) 多克隆位点中的真核表达质粒，由本实验室构建 1．2主要试剂和仪器 全自动发酵罐，BIOSTATC-20