隐孢子虫P23基因的原核表达与间接ELISA检测方法的建立.pdfVIP

上海市畜牧兽医学会 2011 年学术年会论文集 隐孢子虫P23 基因的原核表达及间接ELISA 检测方法的建立 张国恩，米荣升，苏庆美，黄 燕，周 鹏，胡义彬， 秦培兰，呼高伟，陈兆国 （中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室 中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海 200241 ） 摘 要：将隐孢子虫鼠基因型（Cryptosporidium mouse genotype ）P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中，并 用大肠杆菌BL21 （DE3 ）为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原，建立隐孢子虫间接ELISA检测方 法，观察其敏感性、特异性和重复性，并对临床血清样品进行检测。结果隐孢子虫鼠基因型P23基因在大肠 杆菌中获得了高效表达。Western blot检测显示rP23 能被隐孢子虫感染兔血清识别。以纯化rP23为诊断抗原， 成功地建立了检测兔隐孢子虫病的间接ELISA技术。对23份临床血清检测结果显示，该方法检出率高于 Sheathers蔗糖漂浮法、nested PCR法。本研究结果为研制兔隐孢子虫病诊断试剂盒打下了基础。 关键词：隐孢子虫鼠基因型；P23基因；原核表达；间接ELISA PROKARYOTIC EXPRESSION OF P23 GENE OF CRYPTOSPORIDIUM MOUSE GENOTYPE AND DEVELOPMENT OF INDIRECT ELISA DETECTION METHOD ZHANG Guo-en, MI Rong-sheng, SU Qing-mei, HUANG Yan, ZHOU Peng, HU Yi-bin, QIN Pei-lan, HU Gao-wei, CHEN Zhao-guo （Animal-borne Food Safety Research Center of Chinese Academy of Agricultural Sciences , Key Laboratory of Animal Parasitology of the Ministry of Agriculture , Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China） Abstract: The P23 gene of Cryptosporidium mouse genotype was sub-cloned into pGEX-4T-1 vector and expressed in Escherichia coli BL21 （DE3 ）.The recombinant protein rP23 was used to establish an indirect ELISA method for rapid detection of specific Cryptosporidium antibodies in rabbit. The specificity, sensitivity and reproducibility of the method were evaluated and 23 field rabbit sera samples were detected and compared with faeces detection results of Sheathers sucrose flotation and nested PCR. The results showed that the P23 gene was 基金项目： 863 项目（2006AA10A207 ）；科技支撑计划项目（2007BAD40B05 ）；上海市科技兴农重点攻 关项目（沪农科攻字[2005]第 3-4 号）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 （2010JB12 ） 作者简介：张国恩，男，硕士研究生，预防兽医学专业 通讯作者：