桃北京28号变异品种的ISSR与SSR鉴定.pdfVIP

桃北京28号变异品种的ISSR和SSR鉴定 孙淑霞，李靖，涂美艳，陈栋，谢红江，江国良。 四川省农业科学院园艺研究所，四川成都，610066 摘要：品种鉴定是种质资源研究和新品种保护的基础，本研究在形态学鉴定的基础上，通过ISSR和SSR 标记，对具有10多年树龄的3株疑似北京28变异材料及来自同一果园和不同果园对照未变异北京28进行 来自同一果园的两对照未变异北京28号间遗传相似系数为0．96，3株疑似变异材料间遗传相似系数达到 0．99，说明3株疑似变异材料为相同变异品种。通过UPGMA聚类分析发现，当遗传相似系数为0．96时， 三株疑似变异材料与来自同一果园的两对照未变异北京28聚为一类群，且与对照C2亲缘关系最为密切， 说明3株疑似变异品种很可能是由对照C2变异而来。与来自同一果园两对照未变异北京28相比，变异材 料部分ISSR标记位点存在差异，结合表型变异，说明变异材料为一桃新品种。 关键词：桃；ISSR：ssR：变异品种：分子鉴定 桃(P胁nus persica 众多的品种和类型，据不完全统计，全世界现共有3000余个品种或类型，我国约有2000余个 (程中平和黄宏文，2004)。桃为多年生果树，多采用嫁接繁殖，新老品种数量繁多，且不 同地域经常交换，极易造成同名异物及同物异名现象，同时又存在大量的天然杂种类型，一 些优良栽品种有些是实生来的，有些是实生选种或采用混花粉杂交选育而成，如此繁多的品 种和复杂的遗传背景，使得桃品种鉴定及遗传多样性方面的研究具有非常重要的意义。 在品种鉴别方面，以往主要采用形态学、细胞学、孢粉学和同工酶学等方法，这些方法 带有局限性，对一些性状近似的品种很难进行准确的鉴定。而利用DNA指纹鉴定，具有高 度个体特异性和稳定可靠性，对于桃品种鉴别及亲缘关系分析具有重要意义。近年来在桃遗 et et 传多样性方面也做了很多工作(Aranzana，eta1．2002；Wunscha1．2006；Xua1．2006)，但 优质新品种进行鉴定分析，推测“西”是“燕红”的芽变或者亲本来源相同。 SSR和ISSR标记是两种比较理想的遗传标记，由于其操作简单，重复性，已成为当今 应用最为广泛的分子生物学技术。本实验以表型性状发生变异的3株疑似北京28号变异品种 及未变异的北京28为供试材料，利用SSR和ISSR标记进行分析鉴定，旨在为新品种的分类、 鉴定以及推广提供理论依据。 l材料与方法 1．1材料与DNA提取 本研究供试材料共有6份，包括3株疑似变异品种，2株来自同一果园的未变异北京28号， 和1株取自附近果园未变异北京28号。该疑似变异材料发现于成都市龙泉驿区茶店镇，其物 资助项目：国家桃产业技术体系(nycytx-31-ZS-10)。 作者简介：孙淑霞(1977．)，女，山东济宁人，博士、助研，主要从事果树分子生物学研究；E-mail： sshuxia@163．tom。 ·308· +通讯作者，成都市静居路20号，电：028E-瑚ihcorn。 19122@hotmail 候期与果实性状描述都与北京28号类似(如图1)，但耐贮性极好，果实放置10天多不变软 单果重300克左右，风味口感比未变异北京28号也略胜一。 目1疑似北京28号变异品种及其成熟前10天果实生长情况 mL 改进。得到的DNA用ImlTE溶解后再加入165℃预热的CTAB提取液，摇匀，65℃ 水 20min，期间轻轻摇匀3次。冷却后加入2ml氯：异戊醇(24：1)抽提纯化。 1．2引物筛选与PcR扩增 所用ISSR引物参照加拿大比亚大学UBC公司公布的第9套引物序列 ube (HRp：／／v¨vw．biotech 已发表的标记，引物序列由上海生工生物工程技术服务有限公司台成。以野生型和突变型基 性分析。 1．3数据统计分析 将ISSR扩增产物以0、1、9统计建立数据库。在相同迁移位置，有带记为1．无带记 按不加权成对群算术平均法(UPGMA)进行遗传相似性聚类。