siRNA干扰BMI-1基因对膀胱癌EJ细胞增殖的调控作用及其机制.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(8)：1519—1524 · 1519 · [文章编号] 1000—4718(2011)08—1519—06 siRNA干扰 BMI一1基 因对膀胱癌 EJ细胞增殖的 调控作用及其机制球 崔学江，朱定军，韩金利， 梁 武，苏嘉锐，谢文练△ (中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科，广东 广州510120) [摘 要] 目的：对比观察膀胱癌 EJ细胞及人膀胱移行上皮细胞中BMI—J基因及下游pJ6 。、p14 基因 的mRNA及蛋白表达水平．探讨 siRNA干扰BMI—J基因后对EJ细胞增殖的影响及其调控机制。方法：细胞免疫 荧光观察BMI一1、p16 和p14 蛋白在EJ细胞中表达情况及定位。Real—timeRT—PCR检测EJ细胞及膀胱正 常移行上皮细胞中3种基因的表达水平，Westernblotting检测蛋白水平。构建干扰 BMI—J基 因siRNA，通过脂质 体转染导入 EJ细胞中，设立空白对照和阴性干扰对照组 ，检测BMI—J及下游p16,p14基因表达水平及蛋白表达 水平的变化 ；以CCK一8检测细胞生长观察siRNA干扰BMI一』表达对 EJ细胞增殖的抑制作用；用流式细胞术分 析细胞凋亡的改变。结果 ：BMI一1mRNA及蛋白水平在EJ细胞表达高于膀胱移行上皮细胞，而 p16 和p14 mRNA及蛋白在 EJ细胞表达水平稍低于膀胱移行上皮细胞。siRNA干扰BMI—J后可以上调EJ细胞中其下游 p16和p14mRNA及蛋 白水平，使 EJ细胞增殖能力下降，细胞凋亡增多。结论：siRNA干扰BMI—J基因表达对 EJ 细胞的体外生长具有明显的抑制作用，其作用机制与上调其下游 6 。、pJ 基因的表达有关。 [关键词] B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点 1；p16INK4a／p14 ；RNA干扰 ；EJ细胞 [中图分类号] R329．21 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．08．012 RegulatoryeffectofsiRNA interferencetargetingBAIl-1geneonprolif- erationofbladdercancerEJcells CUIXue-jiang，ZHUDing—jun，HANJin—li，HANGWu，SUJia—rui，XIEWen—lian (DepartmentofUrology，SunYat—senMemorialHospital，SunYat—sel1．University，Guangzhou510120，China．E—mail： wenlianxie@126．tom) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatewhethersiRNA—mediatedBMI—Jgenesilencinginhibitstheproliferationof EJcellsbydetectingtheexpressionofBMI—1．pl6N andp14ARFgenesatmRNAandproteinlevelsinbladdercancerEl cellsandnormalbladdertrna sitional epithelium cells．METHODS：TheproteinexpressionandlocalizationofBMI一1， p16m科。nadp14盯 inEJcellsweredeterminedbycellularimmunofluorescence．An siRNA targetingBMI—Jgenewas synthesizednadtrnasfeetedintobladdercracinomaEJceilsbyliposomes．ThemRNA expressionofBMI—1．p16 nad p14 。wagdetectedbyreal—timePCRandhteprotein