汉族家族性高胆固醇血症患者永生化细胞株的构建及其LDL-R功能的研究.pdfVIP

维普资讯 · l86 · 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiolo~ 2007,23(1)：186-188 [文章编号] 1000—47l8(2007)01—0186—03 汉族家族性高胆固醇血症患者永生化细胞株 的 构建及其 LDL—R功能的研究 马斐斐， 王绿娅 ， 刘 舒 ， 蔺 洁 (首都医科大学附属安贞医院京市心肺血管疾病研究所动脉粥样硬化研究室 ，北京 100029) [摘 要] 目的：构建汉族家族性高胆固醇血症 (FH)患者永生化细胞株；分析细胞表面低密度脂蛋白受体 LDL—R活性。方法：将研究对象20例分为3组 ：(1)FH纯合组 6人 。为临床确诊的家族性高胆固醇血症纯合患 者；(2)FH杂合组 l2人，为纯合患者的父母 ；(3)正常对照组2人，为血脂正常者；采用EB病毒转化外周血淋巴细 胞；免疫组化法观察细胞表面LDL—R分布；流式细胞技术观察淋巴细胞 LDL—R功能，4℃时检测其对LDL结合 能力 ，37℃时检测其对 LDL内化功能。结果：免疫组织化学法。在光镜下可见淋巴细胞表面散在分布的LDL—R， 呈现棕褐色颗粒样；流式细胞技术对 3组细胞株检测证实LDL—R功能存在差异 ，EB病毒转化的细胞株具有永生 化特性；正常组LDL—R平均表达量III．35，高于杂合组 (97．17)及纯合组(60．62)；纯合组 37℃内化量228．61， 4℃ 结合量95．20，结合量为正常人的41．6％。杂合组 37℃内化量91．28，4℃结合量 67．42，结合量为正常人的 73．8％。结论：采用EB病毒转化外周血淋巴细胞，成功地构建了汉族家族性高胆固醇血症患者的永生化细胞株。 此细胞株的功能研究表明其具有稳定的永生化特性。完整地保存了FH患者的细胞种质。 [关键词] 淋巴细胞 。永生化；爱泼斯坦巴尔病毒；高胆固醇血症；受体。LDL [KEYWORDS] Lymphotytes，immortal；Epstein—Barrvirus；Hypercholesterolemia；Receptors，LDL [中图分类号] 11363 [文献标识码] A 家族性高胆固醇血症 (fRmilialhypercholesterolemia，Fn) 患者皮肤多处散在黄色瘤 。可见眼角膜弓；且超声心动图也 是LDL—R基因突变导致的显性遗传性疾病 。其特征为血胆 显示各患者有大血管狭窄及散在斑块表现；血脂检测发现各 固醇极度升高、黄色瘤和早发冠心病。由于我国对 FH血及 参数值均高于正常参考标准值。 细胞样本的保存缺乏 良好的方法。无法做进一步研究。造成 1．3 FH杂合组 为纯合患者的父母。共 l2例，经健康体检 我国重大疾病家系资源的浪费。近年来，应用病毒基 因的体 和心功能检测等均未发现有异常。但多数成员血脂水平升 外转导使细胞永生化(immortalization)是建立连续传代、性状 高。 稳定的细胞株的较好方法 ，可 以无限提供细胞来源，有利于 1．4 正常对照组 共2人。经我院体检的健康青年 ，血浆 病理机制的研究…。本实验拟构建汉族FH患者永生化细胞 主要参数包括血浆甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋 白 株。为这一重大疾病家系资源保存种质，并为进一步研究提 a、尿素氮等都在正常范围。 供素材。 2 测定方法 2．1 样品采集 3组测定对象均空腹 12h。在清晨抽取肘静 材 料 和 方 法 脉血 10mL，其中2mL收集血清用于肝、肾功能及血脂测定 ， 1 检测对象 另外8mL抗凝血收集血细胞 ，其中3mL用于无脂血清培养 ， 1．1 诊断标准 我国FH临床诊断标准为：成人血清总胆固 1mL常规方法提取外周血DNA，另外4mL用于转化永生化 醇 (totalchol