慢病毒介导的靶向沉默胰岛素样生长因子1型受体的siRNA对人子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响.pdfVIP

· 1352· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(8)：1352—1357 [文章编号] 1000-4~18(701~)o8—1352—06 慢病毒介导的靶 向沉默胰岛素样生长因子 1型受体的 siRNA对人子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响术 万 碌 ， 李小毛 ， 舒珊荣 ， 张 宇 (中山大学附属第三医院妇科 ，广东 广州510630；广州华侨医院妇产科，广东 广州 510632) [摘 要] 目的：探讨慢病毒介导的靶向沉默胰岛素样生长因子 1型受体 (IGF一1R)的siRNA对人子宫内膜 癌细胞迁移和侵袭功能的影响和可能机制。方法：针对IGF一1R基因设计 siRNA，筛选出最有效的siRNA进行慢 病毒包装扩增。转染人子宫内膜癌 HEC一1B细胞后分别用 real—timePCR和Westernblotting方法验证其沉默效 率，平板克隆法检测其克隆形成情况，Transwell小室方法检测细胞迁移和侵袭情况，real—timePCR检测基质金属 蛋白酶2(MMP一2)和MMP一9mRNA水平的变化。结果：筛选有效siRNA转染子宫内膜癌HEC一1B细胞后，IGF — lR的mRNA水平下降8l％，蛋白表达水平下降91．5％。沉默IGF一1R基因后 ，HEC一1B细胞克隆形成能力下 降，迁移和侵袭能力下降，与对照组和转染阴性组相比有显著差异 (P0．05)；MMP一2和 MMP一9mRNA表达水 平下降(P0．05)。结论：在人子宫内膜癌HEC一1B细胞中下调IGF一1R水平能降低MMP一2和MMP一9mRNA 表达 ，抑制细胞迁移和侵袭能力。 [关键词] 子宫内膜肿瘤；胰岛素样生长因子 1型受体；迁移 ；侵袭 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．08．002 Effectsofientivirus--mediated siRNA targetingIGF --1R on migration andinvasionabilitiesofendometrialcarcinomacells WANJing ，LIXiao—mao ，SHU Shan—rong ，ZHANG Yu (DepartmentofGynecology，theThirdAffiliatedHospital，Sun Yat—senUnive~ity，Guangzhou510630，China； DepartmentofObstetricsGynecology，GuangzhouOve~easChineseHospital，Guangzhou510632，China．E—mail：ti— ger~e777@163．corn) [ABSTRACT] AIM ：Toinvestigatethedown—regulationofinsulin—likegrowthfactortgpe1receptor(IGF一 1R)onthemigrationandinvasionabilitiesofhumanendometrialcancercellHEC一1B．METHODS：ThesiRNAstarge— tingIGF一1Rgeneweresynthesized，clonedintoalentivirusexpressionvectorandtransfectedintoendometrial cnacerHEC 一 1Bcells(HEC一1B—KDgroup)．Thecontrolcells(withoutvirusrtansfeetion，HEC一1B—CONgroup)andnegative virustransfectioncontrolceHs(HEC一1B—NCrgoup)werealsosetup．ThegenesilencingeffectofsiRNAtargetingIGF 一 1Rwasdeterminedbyreal—timePCR nadWestern blottingatmRNA andproteinlev