缺氧后适应中蛋白激酶Cε与钙敏感受体相互作用对乳鼠心肌细胞的保护作用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(8)：1457—1462 · 1457 · [文章编号】 1000—4718(2009)08—1457-06 · 论 著 · 缺氧后适应 中蛋白激酶 C￡与钙敏感受体相互 作用对乳鼠心肌细胞 的保护作用 王艳丽， 孙智睿， 杜丽娟， 于 雪， 王景晓， 赵雅君， 徐长庆 ， 张伟华 (哈尔滨医科大学病理生理教研室 ，黑龙江 哈尔滨 150086) [摘 要] 目的：研究缺氧后适应中蛋白激酶c(PKC)与钙敏感受体 (CaR)相互作用对乳 鼠心肌细胞的保 护作用。方法：Wistar乳 鼠(出生后 3—7d)心肌细胞培养 3—5d，随机分为 7组 ：正常对照组(N组)，缺氧／复氧组 (H／Re组)，缺氧后适应组 (HPC组 )，GdC13组 (GdC13，NiC12，CdC12组 )，caffeine组 (caffeine，GdC13，NiCI2，CdC12 组)，PKC抑制剂组 (PKCI组)和 PKCI+GdC13组 (PKCI，GdC13，NiC12，CdC12组)。采用饱和氮气 pH6．8的 D—Hanks液和含20％新生牛血清的DMEM液复制心肌缺氧／复氧模型。检测各组细胞存活率及各组乳酸脱氢酶 (LDH)活力和丙二醛 (MDA)含量变化，Westernblotting检测心肌细胞膜CaR和PKC。蛋白表达水平，免疫共沉淀检 测细胞膜上 CaR和PKC 的相互作用，激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)测定心肌细胞内游离钙 ([Ca2]i)的变化， TUNEL染色观察细胞凋亡。结果：H／Re、GdCI，和PKCI组的细胞存活率低于对照组和HPC组；反之，LDH活力和 MDA含量高于对照组和HPC组。同时，在 GdC13、caffeine和PKCI+GdCI3组 CaR的蛋白表达水平较HPC和PKCI 组增高，且[ca2]i和细胞凋亡率也高于后2组；而PKCI和PKCI+GdC13组PKC蛋白表达水平低于H／Re、HPC、 GdC1和caffeine组。免疫共沉淀检测到CaR和PKC在细胞膜上发生相互作用。结论 ：在乳鼠心肌细胞缺氧后适 应中，PKC 已转位到细胞膜和 CaR相互作用，此相互作用能减少 [ca“]。，对缺氧的乳鼠心肌细胞在进行复氧时产 生保护作用。 [关键词] 缺氧后适应；蛋白激酶C；受体，钙敏感；心肌细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A InteractionofPKC。 ththeCaR inhypoxicpost—conditioningprotects thecardiomyocytesin neonatalrat WANGYan—li，SUNZhi—rui，DULi—juan，YUXue，WANGjing—xiao，ZHAOYa— jun，XUChang—qing，ZHANGWei—hua (DepartmentofPathophysiology，HarbinMedicalUniversity，Harbin150086，China．E—mail：zhangwhl16@hotmail． com) [ABSTRACT] AIM：TostudytheinteractionofPKC withtheCaRinhypoxicpost—conditioningforprotecting thecardiomyocyteofneonatalrat．METHODS：TheventricularcardiomyocytesofWistarneonatalrat(3—7dafterbirth) wereincubatedforabout3—5d，thenrandomlydividedtheminto7groups：(1)Shamcontrolgroup；(2)Hypoxic／re— oxygenationgroup(H／Regroup)；(3)Hypoxicpost—conditioningrgoup