鼠巨细胞病毒影响神经干细胞分化及分化基因的表达.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology !堑( !；!!二 ! · 2173 · [文章编号] 1000—4718(2009)11—2173—09 鼠巨细胞病毒影响神经干细胞 分化及分化基因的表达 罗 丹 ， 舒赛男， 周玉峰， 刘兴楼 ， 田 佳， 王 惠， 周 华， 李 革， 方 峰 (华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科，湖北武汉430030) [摘 要] 目的：研究鼠巨细胞病毒 (MCMV)感染对体外培养神经干细胞(NSCs)分化及分化基因表达的影 响，探讨 CMV先天感染致脑发育异常的机制。方法：体外分离培养和鉴定BALB／c胎 鼠NSCs，检测细胞分化潜 能 ，用感染复数(MOI)为5、1和0．1MCMVsmith毒株感染NSCs并进行分化培养，倒置显微镜下观察细胞形态学改 变，流式细胞术检测分化细胞比率，免疫荧光法观察 NSCs及其分化细胞标记物nestin、GFAP和NSE表达的变化， 采用MCMV早期抗原(EA)示踪感染过程(MOI=1)，实时定量RT—PCR检测分化早期NSCsWnt信号途径关键分 化基因Neurog2、myc及 CcndlmRNA水平的动态变化。结果：体外培养的NSCs呈球样生长，神经干细胞特异性标 记 nestin表达阳性 ，并可进一步分化为NF一200阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞；分化培养后，感染组 NSCs不能贴壁分化生长并逐渐出现肿胀，细胞 nestin表达下调缓慢并显著高于正常对照组，GFAP和NSE表达显 著低于正常对照组(P0．05)，可检测到MCMVEA(早期抗原)的阳性表达；分化培养 3—9d，感染组nestin阳性细 胞比率显著高于正常对照组，GFAP和NSE阳性细胞比率显著低于正常对照组 (P0．05)；感染组Neurog2mRNA 水平在分化培养后第 1d明显低于正常对照组 (P0。05)，感染组MycmRNA表达水平在第 1—4d显著低于正常 组 (P0．05)，感染组CcndlmRNA水平在第0．5一ld明显低于正常组；感染组和正常组的差异随病毒 MOI的增 加而更明显。结论：(1)MCMV感染可明显抑制 NSCs向神经元和星形胶质细胞方向分化，导致分化细胞比率减 少；(2)MCMV可下凋或干扰NSCsWnt信号途径分化基因Neurog2、Myc和Ccndl的表达；(3)MCMV抑制 NSCs分 化及其分化基因表达的效应与MOI大小存在一定量效依赖关系；(4)MCMV可能通过抑制NSCs分化基因的表达 来抑制其分化，这可能是CMV感染致脑发育异常的重要机制之一。 [关键词] 巨细胞病毒；神经干细胞；细胞分化；基因，Neurog2；基因，Myc；基因，Ccndl [中图分类号] R373 [文献标识码] A Influenceofmurinecytomegalovirusinfection on thedifferentiation and thedifferentiation genesexpressioninneuralstem cells LUODan，SHUSai—nan，ZHOUYu—feng，LIU Xing—lou，TIANJia，WANG Hui， ZHOUHua，LIGe．FANG Feng (DepartmentofPediatrics，TongjiHospital，Tong]iMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wu— han430030，China．E—mail：flung@tjh．tjmu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM ：rheinfluenceofMCMVinfectionondifferentiationanddifferentiationgeneexpressionin neuralstemcells(NSCs)invitrowereinvestigatedforstudyingthemechanismsofbrainabnor