衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化对能量合成的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(7)：1275．1282 · 1275 · [文章编号] 1000-4718(2013)07-1275-O8 衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化 对能量合成的影响水 叶 薇’， 陈赛慧 ， 郝东杰 ， 郑 屹 ， 曹建明 ， 吕建新 (温州医学院 检验医学与生命科学学院，。环境与公共卫生学院，浙江 温州 325035) [摘 要] 目的：利用自然衰老雄性SD大鼠和D-半乳糖 (D—Ga1)诱导的细胞衰老模型，研究在衰老细胞中 线粒体顺乌头酸酶(mitochondriMaconitase，AC02)活性的变化及其对能量合成的影响。方法：利用55mmol／LD— Gal诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5衰老 ，并采用蔗糖连续密度梯度离心法分离大鼠脑组织和 MRC-5细胞的线粒 体；ACO2活性根据反应产物NADPH在340nm的吸光度变化率进行检测，其表达水平分析分别用荧光定量 PCR 和Westemblotting完成；利用试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化还 原状态；组织铁含量的检测则通过菲咯嗪法进行；gt粒体膜电位及腺苷酸含量分别应用JC．1荧光探针法和高效液 相色谱法检测，并计算能荷。结果：随着大鼠月龄增加 ，AC02活性逐渐下降，表达水平无明显差异，组织铁水平逐 渐升高；体外氧化应激实验显示AC02活性随H：0：处理浓度和时间增加而下降；细胞衰老模型中，SOD活性降低， MDA含量升高，AC02活性下降而表达水平未变；自然衰老大鼠和细胞衰老模型中，线粒体膜电位、ATP合成与能 荷呈明显下降趋势。结论：衰老过程中，随着氧化压力增加，氧化应激敏感的AC02活性下降，影响三羧酸循环效 率，同时伴线粒体膜电位下降，进而使得能量合成降低。 [关键词] 衰老；线粒体；顺乌头酸酶；能量合成 ；氧化性应激 [中图分类号】 1t34 [文献标志码] A doj：10．3969／j．issn．1000．4718．2013．07．023 Effectofmitochondrialaconitaseactivityonenergysynthesisduringaging YEWei，CHENSai．hui，HAODong-jie，ZHENGYi，CAOJian．ming，蚰 Jian．xin (SchoolofLaboratoryMedicineandLifeScience，School EnvironmentalSceinceandPublicHealth，WertrhouMedcial College，Wenzhou325035，Ch／na．E-mail：ix／u313@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheeffectofmitochondrialaconitase(AC02)onenergysynhtesisduringaging inmaleSDratsandD—galact0se-inducedcellagingmode1．METHODS：D-galactoseatconcentrationof55mmoL／Lwag uesdtoestablishMRC-5cellagingmode1．IntactmitochondriaintheratbrainandMRC-5cdlswereisolatedbyasucrose densitygradienteentrifugation．TheformationofNADPHwasusedtorepresenthteACO2activityna ddeterminedbyobser- vationofhteabosrbaneeat340nm．FluorescencequnatitativePCRnadWestern blottingwereappliedtodetectedAC02ex- pression．Supemxidedismut