去氢骆驼蓬碱诱导HepG2细胞凋亡并增强其对5-氟尿嘧啶和顺铂的敏感性.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(2)：284-289 [文章编号] 1000-4718(2013)02-0284-06 去氢骆驼蓬碱诱导 HepG2细胞凋亡并增强其 对 5-氟尿嘧啶和顺铂的敏感性 李 强 ， 曹明溶 ， 刘志龙 ， 蒋建伟 (暨南大学 附属第一医院普通外科，医学院生物化学教研室，广东 广州 510632) [摘 要] 目的：研究去氢骆驼蓬碱体外诱导HepG2细胞凋亡过程中c-JunN末端激酶(JNK)途径的作用， 并观察其联合化疗药物对 HepG2细胞的影响。方法：CCK一8法检测联合或不联合使用 JNK特异性抑制剂 SP600125对细胞增殖的抑制作用；克隆形成实验观察不同浓度药物对细胞克隆形成的影响；Hoechst33258染色法 观察细胞形态变化；PI单染检测细胞亚二倍体率；AnnexinV—PI双染测定细胞早期凋亡水平；Westernblotting检测 细胞聚(ADP一核糖)聚合酶(PARP)、JNK和p-JNK蛋 白表达的改变 ；联合5一氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂 (DDP)观察细 胞对化疗药物的敏感性。结果 ：去氢骆驼蓬碱随药物浓度的升高而抑制作用增强，48h后Ic为9．80me,／L；去氢 骆驼蓬碱能显著抑制细胞克隆形成，并且导致细胞凋亡形态学变化；PI单染检测发现细胞周期的G 期前有亚二倍 体凋亡峰，AnnexinV—PI双染检测细胞出现明显的早期凋亡细胞群；Westernblotting检测到随着去氢骆驼蓬碱浓度 增加PARP及p-JNK蛋白表达增加 ，JNK蛋白表达减少；联合使用SP600125对细胞增殖的抑制作用减弱；联合5一FU 或顺铂明显增强化疗药物对肿瘤细胞 的抑制作用，增敏倍数分别为 1．47和5．78倍。结论：去氢骆驼蓬碱对 HepG2细胞有增殖抑制作用，并诱导其凋亡，激活JNK信号通路可能是其主要机制之一；同时去氢骆驼蓬碱可以增 强HepG2细胞对 5一Fu和顺铂的敏感性。 [关键词] 去氢骆驼蓬碱；HepG2细胞 ；c—JunN末端激酶；细胞凋亡 [中图分类号] R735．7 [文献标志码] A doi：10．3969／jissn．1000—4718．2013．02．017 HarmineinducesapoptosisofHepG2cellsviaJNK signalingpathwayand enhancestheirchemosensitivityto5．fluorouracilandcisplatin LIQiang，CAOMing—rong，LIUZhi—long，JIANGJian—wel。 (DepartmentofGeneralSu~eu，theFirstAffiliatedHospital，DepartmentofBiochemistry，SchoolofMedicine，MnUni— versity，Guangzhou510632，China．E—mail：tcaomr@inM．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheproliferation—inhibitoryandapoptosis—inducingeffectsofharmineonhuman hepatocarcinomaHepG2cells．METHODS：TheproliferationofHepG2cellswasdeterminedintheabsenceorpresenceof aJNKinhibitorSP600125byCellCountingKit一8(CCK一8)assayandcolonyformationtest．ThemorphologyofHepG2 cellswasobservedbyHoechst33258stainingunderfluorescencemicroscope．ThecellapoptosiswasnaalyzedbyAnnexin V—PIstaining．Theexpressiono