全反式维甲酸对不同增殖潜能的结肠癌细胞株HIF—1α表达的影响.pdfVIP

· 1416· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(7)：1416一 [文章编号] 1000-4718(2010)07—1416—04 全反式维甲酸对不同增殖潜能的结肠癌 细胞株 HIF—let表达的影响 田瑞华 ， 殷 平 ， 金光辉 ， 冯子杰 ， 吴 媛 ， 郑良楷。 (福建医科大学教学医院一厦门大学附属中山医院病理科，福建 厦门361004；厦门大学医学院基础医学部实验室， 福建 厦门361006；。厦门市妇幼保健院病理科，福建 厦门361003) [摘 要] 目的：探讨全反式维甲酸(ATRA)对不同增殖结肠癌细胞系的生长抑制作用，以及对低氧诱导因 子(HIF—hx)表达的抑制作用。方法：采用体外培养属于结肠癌DukesC期的HCT一8细胞和LOVO细胞，不同浓 度的全反式维甲酸(ATRA)干预。利用MTr观察ATRA对结肠癌细胞系的生长，采用半定量 RT—PCR和Western 印迹检测ATRA干预后在低氧状态下结肠癌细胞中HIF—lot的表达。结果：全反式维甲酸(ATRA)对结肠癌细胞 的增殖有抑制作用，对不同增殖能力的结肠癌细胞 HIF一1 的表达量有抑制作用。结论：全反式维甲酸可以抑制 结肠癌细胞的增殖，对结肠癌细胞HIF—lot的表达有明显的抑制作用。 [关键词] 低氧诱导因子一lot；维甲酸；结肠肿瘤 [KEYWORDS] Hypoxia—induciblefactor—lot；Retinoicacid；Colonicneoplasms [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．07．036 维甲酸(retinoicacid，RA)又称视黄酸或维生素A酸，是 抑制结肠癌细胞 HIF—lot表达及其抑制结肠癌细胞增殖的 维生素A的衍生物。机体内一定浓度的维甲酸可调节细胞 可能性。 的增殖、分化、成熟，是机体正常生长发育和各种生理活动必 材 料 和 方 法 不可少的重要因子，在恶性肿瘤的发生与治疗方面也有重要 的作用。RA由胃肠道吸收后经氧化形成全反式维 甲酸 (all 1 材料 — transretinoicacid，ATRA)，通过单纯弥散进入细胞。 1．1 主要试剂 ATRA购 自Sigma。MTY购 自Amresco。 ATRA在改善p53以及相关下游基因的水平上 ，有明显 DMSO购自Sigma。DMEM、RPMI一1640细胞培养液、胰蛋 白 的作用 -32。ATRA也促进泛素连接酶E3水平的提高 ，是 酶一EDTA、小牛血清均购自Hyclone；总RNA zo1抽提试剂 诱导白血病细胞分化 中的一个重要途径。这些研究表明， 盒购自Invitrogen，逆转录试剂盒以及PCR试剂盒(含 DL2000 p53和相关下游基因的转导途径以及泛素连接酶 信号转 marker)均购 自TaKaRa。总蛋白浓度测试试剂盒购 自Pierce。 导途径，均可以受到ATRA药物的影响而发生改变。 HRP标记的羊抗兔 IgGlI抗购 自lnvitrogen，B—actin抗体购 低氧诱导因子一1(hypoxiainduciblefactor1，HIF一1)是 自Bethyl。HIF—lot抗体由福州迈新代购自Thermo。 迄今为止发现唯一的特异性低氧状态下发挥活性的转录因 1．2 细胞培养及药物干预 结肠腺癌细胞株HCT一8细胞 子 。HIF—lot是HIF一1所独有的氧调节蛋 白，也是 HIF一 以及LOVO细胞 ，购于厦门闽博生物技术有限公司。DMEM 1的可调节亚基 J。Sutton等 在肾脏的缺血再灌注损伤模 细胞培养液和胰蛋 白酶 一EDTA购于 Gibeo，小牛血清购于 型中发现053对HIF—lot合成具有负向的调控机制。Oda Hyclone。癌细胞接种于培养板上，在含有5％CO2、95％O2、 等 在前列腺癌肿瘤标记物巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的 37℃饱和湿度条件下的培养箱中培养，HCT一8细胞用RPMI 研究中，也发现MIF通过了依赖野