去甲肾上腺素诱导大鼠神经胶质细胞cAMP生成与VEGF+mRNA变化的相关性.pdfVIP

维普资讯 生国 理生理 志 ChineseJoumalofPathophysiology 2007，23(12)：2485—2486 · 2485 · [文章编号] 1000—4718(2007)12—2485—02 去 甲肾上腺素诱导大鼠神经胶质细胞 cAMP生成与 VEGFmRNA变化的相关性 王艺明 ， 杨宗城 ， 刘兴德 (贵阳医学院附院 心理科 3心内科，贵州 贵阳550004； 第三军医大学附属西南医院全军烧伤研究所，创伤烧伤复合伤国家重点实验室，重庆400038) [摘 要] 目的：探讨去甲肾上腺素(NE)诱导大鼠神经胶质细胞环磷酸腺苷 (cAMP)变化及与血管内皮细 胞生长因子 (VEGF)mRNA的关系。方法：用放射免疫法检测细胞 cAMP的变化。用实时荧光定量PCR法，检测 细胞VEGFmRNA表达，并分析VEGFmRNA和细胞内cAMP含量的相关性。结果：①随着20I~mol／LNE刺激细胞 时间逐渐延长 ，细胞中cAMP含量逐渐增加 ，有明显的时间依赖性关系 (P0．01)。②不同浓度 (10—50I~mol／L) 的NE刺激细胞2h后，随着 NE浓度的逐渐增高，细胞中cAMP含量逐渐增加，有明显的剂量依赖性关系，与对照 组相 比，有显著差异 (P0．01)，VEGFmRNA与 cAMP的含量 随 NE浓度变化 2者呈显著正相关 (r=0．94， P0．01)。结论：NE能够诱导神经胶质细胞分泌cAMP，与NE诱导细胞 VEGFmRNA变化有相关性。 [关键词] 去甲肾上腺素；环cAMP；内皮生长因子；星形细胞 [KEYWORDS] Norepinephrine；CyclicAMP；Endothelialgrowthfactors；Astrocytes [中图分类号] R363 [文献标识码] A 我们前期研究…提示大 鼠严重烧伤后脑组织血管内皮 I~mol／LNE组；(2)含 20I~mol／L的NE随时间变化组 5组： 细胞生长因子 (VEGF)的基因表达增加 ，并且通过细胞实验 分别为0min、20min、1h、2h、3h组，每组有6份重复样品。 已经阐明 去甲肾上腺素／烧伤血清可诱导神经胶质细胞分 2．3 放射免疫法测定经 NE处理后细胞 cAMP的含量 NE 泌VEGF，可能是严重烧伤后应激性反应导致血管源性脑水 组按不同剂量加样 2h，20I~mol／LNE组按不同的时间取样。 肿的的重要因素，但是导致细胞VEGF分泌增加的信号转导 取样时先弃培养液，马上加入 1mL冰冷的0．24mol／L高氯 途径尚不清楚，本研究探讨去甲肾上腺素诱导神经胶质细胞 酸 ，刮取收集细胞，冰浴下超声破碎，离心取上清以3mol／L 分泌VEGF的途径 ，为临床防治烧伤后应激性脑水肿提供客 KOH中和至 pH值 6．3左右，离心 除去高氯酸钾沉淀， 观实验依据。 一 20℃贮存备测。cAMP测定按试剂盒说明由放射免疫室专 人测定。 材 料 和 方 法 2．4 原代神经胶质细胞 RNA的提取见文献 J。 2．5 采用 实时荧光 定量 PCR法扩增 VEGFmRNA见文 1 试剂 献 [ 。 去甲肾上腺素 (NE)、实时荧光定量 PCR试剂盒购 自 Sigma公司。血管内皮细胞生长因子 (C一1)抗体：SC一7269 3 统计学处理 购 自Santa公司，Dulbecco’SModifiedEagelesMedium(DMEM) 数据以均数 ±标准差 ( ±s)表示 ，采用 SPSS软件进行 单因素